BTN101111 柱式软体动物DNA提取试剂盒

柱式软体动物DNA提取试剂盒说明书
产品编号：BTN101111
规格：50T
产品及特点：
本产品是专门用于从各种软体动物组织中提取基因组DNA 的试剂盒。其原理是基于阳离子去垢剂CTAB 在适当的离子强度条件下，特异地跟基因组DNA 结合形成沉淀，然后在用硅胶膜技术进行进一步纯化。本产品具有下列特点：
1. 适用于用常规方法难以提取的、各种富含多糖的软体动物动物，包括螺类、贝类、乌贼、章鱼和蜗牛等。
2. 提取到的基因组DNA 完整性，其中最长可以到达长度一般在20-50kb。
3. DNA 纯净，OD260/280 一般都在1.9 左右、DNA 片段大小在30-50 Kb 左右，可直接用于PCR、酶切、杂交等。
4. 操作简单，整个过程约30 分钟。
5. 安全无毒，本试剂盒对人体无毒，无腐蚀性和刺激性气味。
6. 价廉物美，与国外同类产品相比质量相当，但价格便宜。
规格及成分：

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	50ml
溶液C	100ml
RNase A（10mg/mL）	150μl
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脱液2.0	10ml
说明书	1份

保存条件：
常温运输和保存，有效期一年。
自备试剂：
氯仿。
使用方法：
1. 匀浆方法一：称取0.1-0.3g 软体动物组织，转移到塑料研钵中，液氮研磨成粉后转移到一个干净的1.5 mL 塑料离心管中。注意：最好避免使用含二氧化硅的玻璃研钵，因为DNA 会吸附在表面，影响得率。在离心管中加入1 mL 65℃预热的溶液A 并用移液枪头充分吹打混匀（如果溶液A 有沉淀，需先在65℃加热溶解后摇匀再使用）。进入第三步。
2. 匀浆方法二：将0.1-0.3g 软体动物组织剪成小块，转移到10-15mL 塑料管中（培养细菌那种离心管即可），加入1 mL 65℃预热的溶液A，用Polytron 式匀浆机（剪切式匀浆机）匀浆1 分钟左右。
3. 65℃保温5-30 分钟，其间最好吹打混匀2-3 次。
4. 转移到新的1.5 mL 离心管中，12000-15000 g 室温离心3 分钟。
5. 将不超过0.75 mL 的上清转移到新离心管中。有时候上清液中还会有少量细小悬浮物，但对后续操作没有影响，不必进行特殊处理。
6. 在上清液中加入等体积的溶液B，上下颠倒30 秒充分混匀，溶液将呈白色混浊状。
7. 将其置于冰浴中放置5-10 分钟。
8. 12000-15000 g 室温离心3 分钟，转移上清到新的1.5 mL 塑料离心管中。
9. 加入0.2 mL 的氯仿(自备)，震荡器上充分振荡30 秒混匀。
10. 12000-15000 g 室温离心3 分钟，两相交界面将有白色膜状物，小心转移上清到新1.5-5mL 塑料离心管中。注意：由于下一步要加1.5 倍体积的溶液C，所以新的离心管的体积要足够大。
11. 加入1.5 倍体积的溶液C，上下颠倒30 秒混匀，然后分多次的将混合液转移到离心吸附柱中。
12. 每次转移0.7-0.8 mL 混合液后，室温放置5-10 分钟。
13. 12000-15000 g 室温1 分钟，弃穿透液。
14. 对需要多次上柱的样品，可以在此将剩余的样品加到离心吸附柱式中，重复第12-14 步的操作。
15. 将0.7 mL 通用洗柱液加入离心柱，室温离心1 分钟，弃穿透液。
16. 在离心吸附柱中加入0.3 mL 的通用洗柱液，12000-15000 g 离心半分钟（此步为第二次洗涤）。
17. 空甩1 分钟去除残留液体。
18. 将离心柱放置在一新的1.5 mL 塑料离心管中，加入30-100 uL DNA 洗脱液2.0。
19. 室温放置5 分钟后离心1 分钟，管底即为软体动物DNA 溶液，可立即使用，也可长期保存在－20℃。
20. 可以重复上步一次，以洗脱更多的DNA（第二次洗脱的DNA 一般有第一次的30%左右）。