BTN101113 柱式软体动物RNA提取试剂盒

柱式软体动物RNA提取试剂盒说明书
产品编号：BTN101113
规格：50T
产品及特点：
本产品专门从各种软体组织样品中快速提取总RNA 的试剂盒，它能有效克服传统TRIzol 方法提取软体组织RNA 时，十分容易产生糖蛋白和酸性多糖污染这一缺点。本产品具有下列特点:
1. 适用于用常规方法难以提取的、各种富含多糖的软体动物，包括螺类、贝类、乌贼、章鱼和蜗牛等。
2. 能有效去除糖蛋白、粘蛋白污染，OD260/280一般均在1.9 以上。
3. RNA 产率一般为5-15 ug/100 mg。
4. 操作简单，整个提取过程一般只需要10 多分钟。
5. 得到的RNA 可以直接用于RT-PCR、Northern 杂交、mRNA 纯化、Primer Extension、RNA Protection、in vitro translation 等研究。
规格及成分：

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	15ml
溶液C	50ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
RNA洗脱液	10ml
说明书	1份

保存条件：
常温运输，4℃保存，有效期一年。
自备试剂：
氯仿。
使用方法：
1. 先将50-200 mg 新鲜或冷冻的软体组织液氮研磨成粉，加入1 mL 溶液A 溶解（溶液A 使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并摇晃混匀），然后将研磨物转移到新的1.5 mL 离心管中, 振荡混合30 秒。也可以将软体组织剪碎后与溶液A 一起用Polytron 匀浆机(内切式匀浆机)匀浆5-20 秒，再转移到1.5 mL 离心管中。匀浆时会产生泡沫，但不影响提取效果。
2. 在离心管中加入0.3 mL 的溶液B 和0.2 mL 自备氯仿，在振荡器上振荡30 秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
3. 室温12000-15000 g 离心3-5 分钟，两相间将有约5-10 毫米厚的细胞破碎物。
4. 将上清液(约0.6 mL)转移到另一干净的1.5 mL 塑料离心管中，下层有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。最好留下100 uL 上清液不取。
5. 加入等体积的溶液C，充分颠倒混匀。
6. 将一半的溶液转移到离心吸附柱中，12000-15000 g 室温离心半分钟，弃穿透液。
7. 将剩下的一半溶液转移到同一离心吸附柱中，12000-15000 g 室温离心半分钟，弃穿透液。
8. 加0.7 mL 通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。
9. 加0.3 mL 通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。此步可以省略。
10. 室温离心半分钟。此步十分重要，否则残留的乙醇会影响RNA 的使用。
11. 将离心吸附柱转移到自备的RNase-free 离心管中，加入50-100 uL RNA洗脱液，室温放置1-2 分钟。
12. 12000-15000 g 室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA 样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
13. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做Northern 杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA 电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA 分子（BioTechniques，28：414，2000）。
14. RNA 产量产率测定：将5-10 μL RNA 溶于TE 缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260 的光吸收。通过光吸收可以得出RNA 浓度（1 OD260的RNA=40 μg/mL），进而计算出RNA 的产量（浓度X 体积)和产率(RNA产量/组织用量)。注意：测定OD 时不要稀释过度，否则浓度会在仪器能测的范围之外。本方法提取的RNA 测OD 时一般最多只能稀释10-20 倍。
15. RNA 纯度测定：无污染的总RNA 的OD260/OD280 一般在1.8-2.1 之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR 等反应。