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BTN111105 MTT检测试剂盒
发布时间：2017-10-01 11:34 | 点击次数：273
MTT检测试剂盒说明书
产品编号：BTN111105
规格：500T
产品及特点：
MTT 广泛用于检测细胞生长，其原理是MTT 可以被活细胞线粒体内的脱氢酶还原生成深紫色的formazan 结晶，而死细胞则无此活性。深紫色的formazan 结晶被溶解后可以通过测定490 nm 波长的光吸收而测定出其浓度，并由此推测出细胞的活力，细胞增殖越旺盛，则吸光度越高；细胞毒性越大，则吸光度越低。其原理如下：
该方法广泛用于细胞活性检测、抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验和肿瘤放射敏感试验等。本产品的特点如下：
1. 采用独特的Formazan 溶解液，可以充分溶解formazan，减少误差。
2. 背景低，灵敏度高，线性范围宽，重复性好。
3. 本产品为足够500 次（5 个96 孔细胞培养板）微孔板检测。
4. 可用于生物活性因子活性检测、抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验、肿瘤放射敏感性测定等。
规格及成分：
保存条件：
低温运输、-20℃保存（但溶液B 也可以常温运输和保存），有效期一年。
自备试剂：
细胞培养基。
使用方法：
下面操作是检测细胞毒性的试验，其他应用跟此类似或更简单（如生长曲线试验），操作步骤可以以此为基础稍作修改即可，故不再赘述。
一：接种细胞
1. 按常规胰酶消化法消化汇合的单层细胞，收集到含血清的培养基中。
2. 200 g 离心5 分钟收集细胞沉淀。
3. 用培养基重悬细胞沉淀，制备成单细胞悬浮液并计数。
4. 将细胞稀释到2.5×103 个/mL-5×104 个/mL 之间（需要根据细胞的生长速度决定），如果不知道生长数度，一般可以稀释到1×104 个/mL。
5. 将足够量的细胞悬液转移到培养皿中（便于用排枪取样）。一个96 孔板的MTT 检测需要约20 mL 的细胞悬液。
6. 用排枪在96 孔板除的第2-11 列各孔正中央加入200μL 细胞悬液（对正常细胞）。如果是肿瘤细胞，则加入100μL 肿瘤细胞悬液和100μL培养基（总体积为200μL）。注意：一定要把细胞加在孔的正中，否则细胞会聚集在孔的角落处，影响试验。
7. 用排枪在96 孔板除的第1 和第12 各孔中加入跟细胞悬液等体积的培养基。第1 列各孔将作为+培养基-细胞+MTT 对照（用于测OD 时调零），第12 列加培养基的作用是减少边缘效应对第11 列反应的影响。
8. 按常规细胞培养方法在37℃和5%CO2 条件下孵育1-3 天，使细胞进入指数生长期。
二：药物处理
9. 用培养基将药物稀释到8 个待测浓度（如果不知道待测浓度，则需要预试验确定），一般一种药物需要做3 块平行板。
10. 去除第2 到第11 列（共10 列）各孔中的培养基（不要触动细胞），保留第1 列和第12 列各孔中的培养基。
11. 在第2 和第11 列（共2 列）的各孔中加入200μL 新鲜培养基，这些孔将作为+培养基+细胞-药物的对照。
12. 在第3 到第10 列（共8 列）各孔中加入8 个浓度梯度的待测药物，每列加入一个浓度的药物。
13. 按常规方法把96 孔板继续放在在37℃和5% CO2 条件下孵育一定的时间，此段时间即为药物处理细胞的时间，由用户自己决定。
14. 处理结束后去除第2 到第11 列（共10 列，均含细胞）所有孔中的培养基，并再加入100μL 新鲜培养基。
15. 每天换培养使细胞数量扩增2-3 倍（所需时间随细胞不同而不同）。
三：存活细胞计数
16. 在生长末期，去除第1 到第11 列各孔中的培养基后，再加入100μL 新鲜培养基和10μL 溶液A（含MTT 成分），用锡箔包裹住96 孔板后放在37℃和5% CO2 条件下继续培养4-8 小时。注意：溶液A 在低温情况下会凝固，使用前请室温放置或20-25℃水浴至全部溶解，摇匀后使用。
MTT 有致癌性，一定要带手套操作。
17. 小心吸弃孔内培养基（含溶液A）。由于培养基可能会影响光吸收，最好尽可能去除。
18. 每孔加入100μL 溶液B，置摇床上低速振荡10 分钟，使MTT 形成的formazan 结晶物充分溶解。
19. 由于产物不稳定，故需要立即在酶联免疫检测仪上选择490 nm 测定吸光度。注意：用第1 列各孔（+培养基-细胞+MTT 对照）调零。
20. 计数同样处理的各次重复的平均值。
21. 以药物浓度为横轴，以吸光度为纵轴绘制曲线。由于各处理吸光度绝对值差别很大，一般需将其转化成生长抑制率（以不加药物的第2 和第11 列各孔数据的平均数作为100%），这样便于计算出IC50，用于各种药物处理效果的比较。注意：如果测生长曲线，则以时间为横轴。正常生长曲线一般呈现S 型，具有促进作用的则斜率加大。
产品编号：BTN111105
规格：500T
产品及特点：
MTT 广泛用于检测细胞生长，其原理是MTT 可以被活细胞线粒体内的脱氢酶还原生成深紫色的formazan 结晶，而死细胞则无此活性。深紫色的formazan 结晶被溶解后可以通过测定490 nm 波长的光吸收而测定出其浓度，并由此推测出细胞的活力，细胞增殖越旺盛，则吸光度越高；细胞毒性越大，则吸光度越低。其原理如下：
该方法广泛用于细胞活性检测、抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验和肿瘤放射敏感试验等。本产品的特点如下：
1. 采用独特的Formazan 溶解液，可以充分溶解formazan，减少误差。
2. 背景低，灵敏度高，线性范围宽，重复性好。
3. 本产品为足够500 次（5 个96 孔细胞培养板）微孔板检测。
4. 可用于生物活性因子活性检测、抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验、肿瘤放射敏感性测定等。
规格及成分：
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 5ml |
| 溶液B | 50ml |
| 说明书 | 1份 |
低温运输、-20℃保存（但溶液B 也可以常温运输和保存），有效期一年。
自备试剂：
细胞培养基。
使用方法：
下面操作是检测细胞毒性的试验，其他应用跟此类似或更简单（如生长曲线试验），操作步骤可以以此为基础稍作修改即可，故不再赘述。
一：接种细胞
1. 按常规胰酶消化法消化汇合的单层细胞，收集到含血清的培养基中。
2. 200 g 离心5 分钟收集细胞沉淀。
3. 用培养基重悬细胞沉淀，制备成单细胞悬浮液并计数。
4. 将细胞稀释到2.5×103 个/mL-5×104 个/mL 之间（需要根据细胞的生长速度决定），如果不知道生长数度，一般可以稀释到1×104 个/mL。
5. 将足够量的细胞悬液转移到培养皿中（便于用排枪取样）。一个96 孔板的MTT 检测需要约20 mL 的细胞悬液。
6. 用排枪在96 孔板除的第2-11 列各孔正中央加入200μL 细胞悬液（对正常细胞）。如果是肿瘤细胞，则加入100μL 肿瘤细胞悬液和100μL培养基（总体积为200μL）。注意：一定要把细胞加在孔的正中，否则细胞会聚集在孔的角落处，影响试验。
7. 用排枪在96 孔板除的第1 和第12 各孔中加入跟细胞悬液等体积的培养基。第1 列各孔将作为+培养基-细胞+MTT 对照（用于测OD 时调零），第12 列加培养基的作用是减少边缘效应对第11 列反应的影响。
8. 按常规细胞培养方法在37℃和5%CO2 条件下孵育1-3 天，使细胞进入指数生长期。
二：药物处理
9. 用培养基将药物稀释到8 个待测浓度（如果不知道待测浓度，则需要预试验确定），一般一种药物需要做3 块平行板。
10. 去除第2 到第11 列（共10 列）各孔中的培养基（不要触动细胞），保留第1 列和第12 列各孔中的培养基。
11. 在第2 和第11 列（共2 列）的各孔中加入200μL 新鲜培养基，这些孔将作为+培养基+细胞-药物的对照。
12. 在第3 到第10 列（共8 列）各孔中加入8 个浓度梯度的待测药物，每列加入一个浓度的药物。
13. 按常规方法把96 孔板继续放在在37℃和5% CO2 条件下孵育一定的时间，此段时间即为药物处理细胞的时间，由用户自己决定。
14. 处理结束后去除第2 到第11 列（共10 列，均含细胞）所有孔中的培养基，并再加入100μL 新鲜培养基。
15. 每天换培养使细胞数量扩增2-3 倍（所需时间随细胞不同而不同）。
三：存活细胞计数
16. 在生长末期，去除第1 到第11 列各孔中的培养基后，再加入100μL 新鲜培养基和10μL 溶液A（含MTT 成分），用锡箔包裹住96 孔板后放在37℃和5% CO2 条件下继续培养4-8 小时。注意：溶液A 在低温情况下会凝固，使用前请室温放置或20-25℃水浴至全部溶解，摇匀后使用。
MTT 有致癌性，一定要带手套操作。
17. 小心吸弃孔内培养基（含溶液A）。由于培养基可能会影响光吸收，最好尽可能去除。
18. 每孔加入100μL 溶液B，置摇床上低速振荡10 分钟，使MTT 形成的formazan 结晶物充分溶解。
19. 由于产物不稳定，故需要立即在酶联免疫检测仪上选择490 nm 测定吸光度。注意：用第1 列各孔（+培养基-细胞+MTT 对照）调零。
20. 计数同样处理的各次重复的平均值。
21. 以药物浓度为横轴，以吸光度为纵轴绘制曲线。由于各处理吸光度绝对值差别很大，一般需将其转化成生长抑制率（以不加药物的第2 和第11 列各孔数据的平均数作为100%），这样便于计算出IC50，用于各种药物处理效果的比较。注意：如果测生长曲线，则以时间为横轴。正常生长曲线一般呈现S 型，具有促进作用的则斜率加大。