BTN120403 虾碱性磷酸酶

虾碱性磷酸酶说明书
产品编号：BTN120403
规格：300U
产品及特点：
Shrimp Alkaline Phosphatase（SAP）虾碱性磷酸酶与大肠杆菌来源的碱性磷酸酶同样，催化所有磷酸单酯的水解，不能催化磷酸二酯以及磷酸三酯的水解，也能催化ATP 等焦磷酸键水解。但该酶与大肠杆菌来源的BAP 以及小牛肠来源的CIAP 不同，通过65℃，15 分钟的热处理，可使酶完全不可逆失活。
本产品具有下列用途：
1. 去除DNA 片段的5 ’ - 末端的磷酸基。防止线状DNA 的自身环化（Self-Ligation）。
2. 除去PCR 反应后残存的dNTP。PCR 产物进行测序时，在反应体系中如果有多余的Primer 和dNTP，将影响测序反应的正常进行。使用Exonuclease I分解残存的Primer；用SAP 处理可降解多余的dNTP，之后不需要对PCR产物进行精制，立即可以进行测序反应。
活性单位定义:
在37℃、pH9.8的条件下，1分钟内水解对硝基苯磷酸盐（p-nitrophenol phosphate）生成1μmol的对硝基苯酚（p-nitrophenol）所需要的酶量定义为1个活性单位（U）。
纯度:
1. 5 U 的本酶和1 μg 的λDNA-Hind III 片段在37℃、pH7.5 的条件下反应1 小时，DNA 的电泳谱带不发生变化。
2. 5 U 的本酶和1 μg 的16S，23S rRNA 在37℃、pH7.5 的条件下反应1 小时，RNA 的电泳谱带不发生变化。
Buffer 成分:
储存Buffer: 25 mM Tris-HCl, pH7.6（4℃）；5 mM MgCl2；50% Glycerol。
缓冲液Buffer,10×：500 mM Tris- HCl, pH9.0（37℃）；50 mM MgCl2。
规格及成分：

成分	规格
虾碱性磷酸酶（1U/μL）	300U
10×Buffer	1ml
说明书	1份

保存条件：
低温运输，-20℃保存，有效期一年。
使用方法：
使用举例：

• 在1.5 mL 离心管中配制下列反应液，定容至50 μL。

成分	用量
DNA Fragment	1～10 pmol
Shrimp Alkaline Phosphatase（1～5 μL）	1～5 U
10× Buffer	5 μL
dH2O	up to 50 μL

2. 37℃反应15～30 分钟。
3. 65℃反应15 分钟（加热失活）。
4. 加入2.5 μL 的3 M NaCl（终浓度150 mM）。
5. 乙醇沉淀（加入125 μL（2.5 倍量）的预冷无水乙醇，-20℃放置30～60 分钟，离心。
6. 加入200 μL 的70％冷乙醇清洗沉淀后，干燥。
7. TE Buffer（<20μL）溶解沉淀。