BTN120420 核酸外切酶III

核酸外切酶III说明书
产品编号：BTN120420
规格：2500U
产品及特点：
本产品具有从双链DNA的3′-OH末端降解生成5′-单核苷酸的3′→5′外切酶活性。本酶对双链DNA具有高度特异性，能降解平滑末端、3′凹陷末端及有切口的DNA，但是不能降解3′-突出末端。所以，可以用产生不同末端的限制酶通过双重降解（Double digestion）后，利用核酸外切酶III的3′→5′的外切酶活性，从一端降解，得到互补的单链DNA和5′-P单核苷酸。与核酸酶相比，本酶的碱基特异性较小，如在富含GC的位置上，由于反应停止的机率较低，可用于DNA的删除制作。
本产品主要用途：
1. 通过部分降解双链DNA片段，产生一部分单链DNA片段，作DNA聚合酶的底物（生成的DNA可用于双脱氧法序列分析）。
2. 与单链特异性核酸酶（S1核酸酶或绿豆核酸酶）合用制作DNA缺失片段。本酶对双链结构DNA具有高度特异性，对于双酶切DNA片段（例如EcoR I-Pst I 片段）能制作单向（EcoR I方向）缺失的DNA。
3. DNA-蛋白质相互作用分析。
规格及成分：

成分	规格
核酸外切酶III（200 U/μL）	12.5μl
10×核酸外切酶III缓冲液	500μl

保存条件：
低温运输，-20℃保存，半年以上长期保存时请在-80℃冷冻保存。
自备试剂：
超纯水。
使用方法：
DNA单链部分的特异性分解
1. 将底物DNA与核酸外切酶III以及核酸外切酶III缓冲液混合，反应体系如下：

5′突出端或平头末端DNA	5-10μg
10×核酸外切酶III缓冲液	10μL
核酸外切酶（200 U/μL）	2μL
超纯水	up to 100μL

2. 将反应混合液置于37℃下保温1-10分钟。
3. 65℃下加热5分钟，终止反应。
4. 反应产物用于进一步实验。（在上述条件下，每分钟约移除300 bp左右。）