BTN120421 T4 RNA连接酶

T4 RNA连接酶说明书
产品编号：BTN120421
规格：1000U
产品及特点：
T4 RNA连接酶催化ATP降解为AMP和焦磷酸的反应，释放的能量能使寡核苷酸的5’-P末端和3’-OH末端结合，也能催化分子内连接的环化反应以及分子间的连接反应。最小底物为NpNpNOH（3’-OH Oligomer受体）、pNp（5’、3’-DP monomer供体）。连接效率受供体和受体各自的碱基影响很大。与RNA相比DNA连接的效率较低。本产品主要用途：
1.单链RNA及单链DNA的3’-OH末端的标记。
2.单链Oligo RNA及单链Oligo DNA的合成。
3.合成全长cDNA。
活性单位定义：
以Oligo(A)n为底物，标记RNA 3’末端，在5℃、10分钟内使1 pmoL［5′-32P］pCp 掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位。
活性定义反应液：
50 mM HEPES-NaOH,pH 7.5，20 mM MgCl2，3.3mM DTT，6 μM ATP，0.001% BSA，10% DMSO，1.2 μM 3’-OH RNA，2.4 μM 5′-32P］pCp。
储存Buffer:
20 mM Tris-HCl（pH7.5），50 mM NaCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA，50 %Glycerol。
反应Buffer，10×：
500 mM Tris-HCl（pH7.5），100 mM MgCl2，100 mM DTT，10 mM ATP。
规格及成分：

成分	规格
T4 RNA连接酶，(40 U/μL)	1000U
10×反应缓冲液	1ml
0.1% BSA	1ml
说明书	1份

保存条件：
低温运输，-20℃保存，有效期一年。
自备试剂：
样品、超纯水等。
使用方法：
单链RNA、DNA片段的连接反应举例： 

• 在微量离心管中配制下列反应液，总体积为50 μL。

成分	加入量
Single-stranded RNA or DNA	1-2 μg
10×反应缓冲液	5 μL
0.1% BSA	3 μL
T4 RNA连接酶	40-50 U
PEG 6000	final 25%
超纯水	补水到50 μL

• 在5-16℃下反应16-18小时。加入2 μL的0.5 M EDTA终止反应。

备注：
1.连接反应的最适反应温度为5-16℃，若超过该温度活性会被抑制。
2.PEG共存的条件下能够促进反应，而反应特异性不变。
3.为了提高连接反应效率，建议使用酶浓度高而ATP浓度尽量低的反应条件。
4.在10×反应缓冲液中如果直接加入0.1%的BSA会产生大量白色沉淀，因此在配制反应液时，请按下面顺序添加试剂：dH2O→10×Buffer→0.1% BSA→底物RNA or DNA。