产品分类
公司新闻
BTN120504 大提柱式藻类RNA提取试剂盒
发布时间：2017-10-01 11:41 | 点击次数：336
大提柱式藻类RNA提取试剂盒说明书
产品编号：BTN120504
规格：5T
产品及特点：
本产品是在本公司柱式藻类RNA提取试剂盒（BTN120503）的大提升级产品，跟柱式藻类RNA提取试剂盒相比，它具有下列特点：
1. 样品处理量大，最多可以处理50 mL 液体藻类培养物。
2. 操作简单快捷，整个过程只需要约30 分钟。
3. RNA 纯度高，OD260/280 一般都在2.0 左右，可直接用于RT-PCR、Northern 杂交、microarray hybridization、cDNA 合成等。
4. RNA 产量高，一般在20-70 μg/mL液体藻类培养物(约2.0×107个细胞)。
非酶细胞破裂法，适用于各种形态的藻类和各个种属的藻类。。
规格及成分：
保存条件：
常温运输，4℃保存，有效期一年。
自备试剂：氯仿。
使用方法：
1. 将 50 mL 液体藻类培养物在塑料离心管中5,000-7,000 rpm 4℃离心1 分钟，并弃尽液体培养基（可以分多次离心）。
2. 加入10 mL 溶液A 并充分吹打混匀。注意：溶液A 存放时容易产生沉淀，如果有沉淀，用前请置于65℃融化并充分摇晃均匀。
3. 加入10 mL 溶液B，剧烈振荡30 秒。
4. 65℃保温5 分钟。注意：不要超过5 分钟，否则RNA 容易降解。
5. 5,000-7,000 rpm 4℃离心3-5 分钟，转移上清到一自备的、干净的50 mL 塑料离心管中。
6. 在上清液中加入2 mL 自备的氯仿，充分振荡30 秒混匀。
7. 4℃ 5,000-7,000 rpm 离心3-5 分钟，转移上清液到一自备的、干净的50 mL塑料离心管中。
8. 加入相当于上清液（约10 mL 左右）3 倍体积的溶液C 和1 倍体积的溶液D，充分混匀。如果上清为10 mL，则加入30 mL 溶液C 和10 mL溶液D。
9. 将混合液分多次转移到离心吸附柱中，每次转移后需要室温放置2-3 分钟以让RNA 跟吸附膜充分结合，然后5,000-7,000 rpm 室温离心30-60 秒，弃收集管中的穿透液，然后再加入后一批混合液，重复操作，直到混合液全部挂柱。
10. 第一次洗涤：将10 mL 通用洗柱液加到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
11. 第二次洗涤：一次洗涤一般足够去除杂质，但如果样品OD260/280 比值不高，可以再用10 mL 通用洗柱液重复上步洗涤一次。
12. 室温离心空柱子（带收集管）半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响RNA 的使用。
13. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 50 mL 塑料离心管中，加入1 mL RNA 洗脱液。
14. 室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA 样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
15. RNA完整性的电泳检测：
注意：普通DNA 上样液不含变性剂，更没经过去RNase处理，所以最好不要用于RNA 电泳。
16. RNA产量和纯度产率测定：
将5-10 uL RNA 溶于TE 缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA 浓度（1 OD260 的RNA=40μg/mL），进而计算出RNA 的产量（浓度×体积)和产率(RNA 产量/细菌用量)。注意不要将RNA 稀释在DEPC 水中检测OD260 和OD280，否则光吸收比在TE 中测得的低10%-15%；也不要稀释过度，使OD读数在仪器的有效范围之外，这样得到的OD 比值没有意义。
疑难解答：
Q：上样孔里的红色荧光物一定是污染的基因组DNA 吗？
A：不是。用TAE 或TBE 电泳液和非变性胶电泳RNA 时容易产生此现象，百奥莱博初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA 通过碱基互补或通过硼酸络合（如果使用TBE 作电泳液的话）形成的复合物，加RNase 处理后，这些红色荧光物一般会消失。为避免此现象，建议最好使用甲醛变性胶电泳。如果需要使用非变性胶，也必须在上样前使RNA变性。使用百奥莱博优化的上样/变性/染色三用溶液RNAON 可以使RNA在非变性胶上电泳时也有较好分辨率。使用非变性胶时，可以使用TAE或超快电泳液SuperBuffer-2，最好不要使用TBE 缓冲液，因为TBE 中的硼酸能与RNA 的多羟基形成复合物，RNA 很难形成锐利的条带。
Q：如何确认和去处除污染的基因组DNA？
A：如果怀疑有DNA 污染，可以用RNase 处理RNA 样品，然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组DNA 污染。进一步确认可以使用PCR 扩增法。去除污染的DNA 可以使用5 分钟柱式DNA 清除剂、非酶的DNA 去除剂DNA Erasol 或RNase-free DNase，由于
RNase-free DNase 一般都有残留的RNase 污染，所以必须严格按照厂家提供的使用说明书进行操作。
产品编号：BTN120504
规格：5T
产品及特点：
本产品是在本公司柱式藻类RNA提取试剂盒（BTN120503）的大提升级产品，跟柱式藻类RNA提取试剂盒相比，它具有下列特点：
1. 样品处理量大，最多可以处理50 mL 液体藻类培养物。
2. 操作简单快捷，整个过程只需要约30 分钟。
3. RNA 纯度高，OD260/280 一般都在2.0 左右，可直接用于RT-PCR、Northern 杂交、microarray hybridization、cDNA 合成等。
4. RNA 产量高，一般在20-70 μg/mL液体藻类培养物(约2.0×107个细胞)。
非酶细胞破裂法，适用于各种形态的藻类和各个种属的藻类。。
规格及成分：
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 50ml |
| 溶液B | 50ml |
| 溶液C | 150ml |
| 溶液D | 50ml |
| 大提离心吸附柱 | 5套 |
| 通用洗柱液 | 100ml |
| RNA 洗脱液 | 10ml |
| 说明书 | 1份 |
常温运输，4℃保存，有效期一年。
自备试剂：氯仿。
使用方法：
1. 将 50 mL 液体藻类培养物在塑料离心管中5,000-7,000 rpm 4℃离心1 分钟，并弃尽液体培养基（可以分多次离心）。
2. 加入10 mL 溶液A 并充分吹打混匀。注意：溶液A 存放时容易产生沉淀，如果有沉淀，用前请置于65℃融化并充分摇晃均匀。
3. 加入10 mL 溶液B，剧烈振荡30 秒。
4. 65℃保温5 分钟。注意：不要超过5 分钟，否则RNA 容易降解。
5. 5,000-7,000 rpm 4℃离心3-5 分钟，转移上清到一自备的、干净的50 mL 塑料离心管中。
6. 在上清液中加入2 mL 自备的氯仿，充分振荡30 秒混匀。
7. 4℃ 5,000-7,000 rpm 离心3-5 分钟，转移上清液到一自备的、干净的50 mL塑料离心管中。
8. 加入相当于上清液（约10 mL 左右）3 倍体积的溶液C 和1 倍体积的溶液D，充分混匀。如果上清为10 mL，则加入30 mL 溶液C 和10 mL溶液D。
9. 将混合液分多次转移到离心吸附柱中，每次转移后需要室温放置2-3 分钟以让RNA 跟吸附膜充分结合，然后5,000-7,000 rpm 室温离心30-60 秒，弃收集管中的穿透液，然后再加入后一批混合液，重复操作，直到混合液全部挂柱。
10. 第一次洗涤：将10 mL 通用洗柱液加到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
11. 第二次洗涤：一次洗涤一般足够去除杂质，但如果样品OD260/280 比值不高，可以再用10 mL 通用洗柱液重复上步洗涤一次。
12. 室温离心空柱子（带收集管）半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响RNA 的使用。
13. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 50 mL 塑料离心管中，加入1 mL RNA 洗脱液。
14. 室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA 样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
15. RNA完整性的电泳检测：
注意：普通DNA 上样液不含变性剂，更没经过去RNase处理，所以最好不要用于RNA 电泳。
16. RNA产量和纯度产率测定：
将5-10 uL RNA 溶于TE 缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA 浓度（1 OD260 的RNA=40μg/mL），进而计算出RNA 的产量（浓度×体积)和产率(RNA 产量/细菌用量)。注意不要将RNA 稀释在DEPC 水中检测OD260 和OD280，否则光吸收比在TE 中测得的低10%-15%；也不要稀释过度，使OD读数在仪器的有效范围之外，这样得到的OD 比值没有意义。
疑难解答：
Q：上样孔里的红色荧光物一定是污染的基因组DNA 吗？
A：不是。用TAE 或TBE 电泳液和非变性胶电泳RNA 时容易产生此现象，百奥莱博初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA 通过碱基互补或通过硼酸络合（如果使用TBE 作电泳液的话）形成的复合物，加RNase 处理后，这些红色荧光物一般会消失。为避免此现象，建议最好使用甲醛变性胶电泳。如果需要使用非变性胶，也必须在上样前使RNA变性。使用百奥莱博优化的上样/变性/染色三用溶液RNAON 可以使RNA在非变性胶上电泳时也有较好分辨率。使用非变性胶时，可以使用TAE或超快电泳液SuperBuffer-2，最好不要使用TBE 缓冲液，因为TBE 中的硼酸能与RNA 的多羟基形成复合物，RNA 很难形成锐利的条带。
Q：如何确认和去处除污染的基因组DNA？
A：如果怀疑有DNA 污染，可以用RNase 处理RNA 样品，然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组DNA 污染。进一步确认可以使用PCR 扩增法。去除污染的DNA 可以使用5 分钟柱式DNA 清除剂、非酶的DNA 去除剂DNA Erasol 或RNase-free DNase，由于
RNase-free DNase 一般都有残留的RNase 污染，所以必须严格按照厂家提供的使用说明书进行操作。