BTN120506 T4聚核苷酸激酶

T4聚核苷酸激酶说明书
产品编号：BTN120506
规格：200U
产品及特点：
T4 聚核苷酸激酶能够催化 ATP 的 γ-位磷酸基团转移到寡核苷酸链（双链或单链 DNA 或 RNA）的 5´ -羟基末端以及 3´ -单磷酸核苷上。本产品还具有 3´ 磷酸酶活性，将 3´ -磷酸基团从寡核苷酸的 3´ 磷酸末端、脱氧 3´ -单磷酸核苷和脱氧 3´ -二磷酸核苷上水解掉。其反应示意图如下：
 
该酶的主要用途有：
1. DNA 或 RNA 的末端标记，用作寡核苷酸探针和进行DNA 测序。
2. 寡核苷酸 5‘末端的磷酸化，以便进行连接反应。
3. 除去 3‘磷酸基团。
规格及成分：

成分	规格
T4 聚核苷酸激酶，10 U/μL	25μl
10×反应缓冲液	1ml
说明书	1份

保存条件：
低温运输，-20℃保存，有效期一年。
自备试剂：
0.5 M EDTA (pH8.0)、[γ-32P or γ-33P]-ATP 或0.1 mM ATP、DNA 纯化试剂盒。
使用方法：
一、DNA 5'末端标记：
 
 
 
 
1. 参考如下表格设置反应体系：

待磷酸化DNA	1～50 pmol(5'末端)
10×反应缓冲液	5 μL
自备的[γ-32P or γ-33P]-ATP (3,000Ci/mmol)	50 pmol
补充无核酸酶的去离子水	至48 μL
T4 聚核苷酸激酶，10 U/μL	2 μL

2. 按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex 在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
3. 37℃孵育30 分钟。
4. 加入自备的 1 μL 0.5M EDTA(pH8.0)混匀，以终止反应。
5. 后续可以使用酚氯仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化标记的 DNA，也可以使用适当的DNA 纯化试剂盒进行纯化。DNA纯化试剂盒可以向我公司订购。
二、DNA 5'末端磷酸化：
1. 参考如下表格设置反应体系：

待磷酸化DNA	1～50 pmol(5'末端)
10×反应缓冲液	5 μL
自备的0.1 mM ATP	3 μL
补充无核酸酶的去离子水	至48 μL
T4 聚核苷酸激酶，10 U/μL	2 μL

2. 按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex 在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
3. 37℃孵育30 分钟。
4. 加入自备的1 μL 0.5M EDTA(pH8.0)混匀，以终止反应。
5. 后续可以使用酚氯仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化标记的DNA，也可以使用适当的DNA 纯化试剂盒进行纯化。
相关信息：
活性单位定义:
1 单位指在37℃条件下，30 分钟内催化 1 nmol 酸不溶性 [32P] 掺入所需要的酶量。
反应条件：
1×反应缓冲液：[70 mM Tris-HCl（pH 7.6 @ 25℃），10 mM MgCl2，5 mM DTT]，37℃ 温育。
热失活：
65℃ 加热 20分钟。
来源：
重组 E. coli 菌株，克隆有 T4 多聚核苷酸激酶或修饰的 T4 多聚核苷酸激酶基因。