BTN120510 ATP依赖的Dnase
发布时间：2017-10-01 11:42 | 点击次数：
ATP依赖的Dnase说明书
产品编号：BTN120510
规格：200U
产品及特点：
在含有ATP的Buffer反应体系中，本产品能够特异性地水解线性双链DNA产生脱氧核糖核酸，但对环状双链DNA不起作用。本产品可用于除去质粒或粘粒等环状DNA样品中残留的少量线性基因组DNA片段的污染，减少对后续实验的影响。在基因工程实验中，制备的质粒和粘粒，即使是通过氯化铯/溴乙锭梯度离心方法或其它严格的方法制备，也常含有碱裂解操作过程中带来的少量细菌基因组DNA片段的污染，尤其在制备低拷贝克隆载体的质粒或粘粒等时，这种现象更为明显，使用本产品即可以有效的去除这些污染。本产品具有下列特点：
1.使用本制品可以有效除去样品中的基因组DNA，然后通过70℃、5 min的加热处理即可使酶完全失活，从而减少基因组污染物对质粒或粘粒等的常规分析、亚克隆和序列测定等后续实验结果的影响。
2.此产品可用于低拷贝的质粒或粘粒的提取及除去质粒等环状DNA中线性基因组DNA污染物。
活性单位定义：
以线性化的pMD18 DNA为底物，在1 mM ATP存在、pH9.4缓冲液中，37℃反应30分钟，催化生成1 nmol脱氧核苷酸所需要的酶量，定义为1活性单位（U）。在10 μL反应体系中，加入本产品0.2 U，10×ATP依赖的DNA酶Buffer 1 μL，0.2 μg的线性化的pMD18 DNA，在37℃条件下反应30分钟，能够使线性化的pMD18 DNA产生95%以上的降解作用。
Buffer成分:
储存Buffer: Tris-HCl（pH7.5） 20 mM，DTT 1 mM，EDTA 0.1 mM，Glycerol 50%。
反应Buffer，10×：
Glycine–NaOH（pH9.4） 500 mM，DTT 10 mM，MgCl2 300 mM，ATP 20 mM。
规格及成分：
| 成分 | 规格 |
| ATP依赖的DNA酶，（10 U/μL） | 200U |
| 10× 反应Buffer | 0.5ml |
| 说明书 | 1份 |
低温运输，-20℃保存，有效期一年。
自备试剂：
样品等。
使用方法：
使用举例
使用本产品除去 pUC18质粒中含有的大肠杆菌基因组DNA片段污染物（占60%），可以提高阳性克隆的比率。
- 在微量离心管中配制下列反应液：
| 成分 | 样品 | 对照 |
| 10× 反应Buffer | 1 μL | 1 μL |
| pUC18质粒DNA混合物 | 1 μg | 1 μg |
| ATP依赖的DNA酶 | 2 U | - |
| dH2O | Up to 10 μL | Up to 10 μL |
- 37℃反应2小时。长时间反应效率有下降的倾向，建议反应时间1～2小时。
- 70℃加热5分钟，使ATP依赖的DNA酶失活。
- 在微量离心管中制备下列酶切反应液：
| 成分 | 用量 |
| 10×H Buffer（客户自备） | 1 μL |
| 第3步反应液 | 5 μL |
| EcoR I（客户自备） | 30 U |
| dH2O | Up to 10 μL |
- 37℃反应1小时之后，进行60℃ 15 min反应，使EcoR I失活。
- 在微量离心管中制备下列连接反应液：
| 成分 | 用量 |
| 10×T4 DNA Ligase Buffer（客户自备） | 1 μL |
| 第5步酶切反应液 | 2 μL |
| T4 DNA Ligase（客户自备） | 350 U |
| dH2O | Up to 10 μL |
- 16℃反应1小时。