柱式冻存血液DNA提取试剂盒说明书
产品编号：BTN120720
规格：50T/250T
产品及特点：
血液DNA 是重要的研究材料，但是血液DNA 在常温下存放的时间很短，因此很多血液样品都是冻凝存放。由于冻存过程中形成的冰晶会刺破细胞膜，释放出DNA，因此从冻存血液中高效提取DNA 一直是个棘手的问题。本产品就是北京我公司开发的专门用于从冻存血液中提取DNA 的试剂盒，它具有下列特点：
1. 适用于各种动物血液，包括禽类和昆虫。
2. 微量提取，每次可处理400μL 血液。
3. DNA 完整性好，纯化后长度在20-50 Kb 之间。
4. DNA 纯净，OD260/OD280 在1.8-2.0 之间，可直接用于PCR、酶切、杂交等实验。DNA 产量一般在10 μg/mL 血液。
5. 操作简单，整个过程约20 分钟，室温操作，适合大规模样品处理。
规格及成分：

成分	50T	250T
溶液A	20ml	100ml
溶液B	20ml	100ml
溶液C	100ml	500ml
离心吸附柱	50套	250套
通用洗柱液	50ml	250ml
DNA洗脱液2.0	50ml	250ml
说明书	1份	1份

保存条件：
常温运输和保存，有效期一年。
自备试剂：
氯仿。
使用方法：
1. 从-20℃或更低的冰箱中取出血液样品，室温下静置融化。
2. 将400μL 解冻的血液转移到一个1.5mL 的塑料离心管中，加入400μL溶液A，充分震荡混匀。如果是禽类血液，则少加10 倍，只加40μL。
3. 在混合液中加入400μL 溶液B 和200μL 氯仿（自备），振荡1 分钟。由于离心管比较满，所以需要确保管底溶液转动起来，否则只是液面振动而已。
4. 4℃12000 g 离心10 分钟，小心将上清转移至一新的1.5mL 塑料离心管
中。注意：最好不要室温离心，如果室温离心，则离心后部分样品的中间白色层可能会很厚，只能得到很少的上清。
5. 将约0.7-0.8mL 上清转移到10-15mL 塑料离心管中（不要使用玻璃离心管，否则DNA 会吸附到管壁上。常用的培养提质粒用的细菌的培养管即可）。
6. 加入2.5 倍上清体积的溶液C（2mL），立即摇晃混匀。
7. 将混合液分多次转移到离心吸附柱中，每次0.7mL 左右，转移后静置2-5分钟，以使DNA 与膜充分结合，然后室温12000 g 离心30 秒，弃收集管中的废液，然后再加入0.7 mL，重复上述操作，直到全部混合液挂柱。
8. 在离心吸附柱中加入0.7mL 通用洗柱液，室温12000 g 离心30 秒，弃收集管中的废液。
9. 在离心吸附柱中再加入0.3mL 通用洗柱液，室温12000 g 离心30 秒，弃收集管中的废液。
10. 室温12000 g 离心30 秒，去尽残留液体（此步骤十分重要，不要省略，否则残留的含乙醇的通用洗柱液将抑制后续的酶反应）。
11. 将离心吸附柱置于一新的1.5mL 塑料离心管中，加入50μL DNA 洗脱液2.0，室温放置2 分钟。如果将DNA 洗脱液2.0 在65℃预热后再使用，洗脱DNA 的效果更佳。
12. 室温12000 g 离心30 秒，离心管底部溶液即DNA 溶液，可立即使用或-20℃长期保存。
13. 本产品所用离心吸附柱吸附能力比较强，如果再次用DNA 洗脱液2.0洗脱，还能洗脱下一些血液DNA。
疑难解答：
Q：保存血液样品时温度越低越好吗？
A： 不是。Tegelstrom 曾经比较了分别在-70℃, -20℃, 4℃保存了6个月的蛙血，发现保存温度越低，血液DNA 的断裂越严重（详见 Tegelstrom, 1989.Cold room Storage of blood may be better than storage at -70℃.Fingerprint News, 4:5-6）。
Q: 本产品是否可以用于放量操作？
A: 可以在大的离心管中进行放量操作，如每次处理5-100mL 血液，只是客户需要单独购买红细胞裂解液，并按比例增加溶液A 和溶液B 的用量。
Q: 冷冻血液为何DNA 产量很低？
A: 冷冻过程中形成的冰晶刺破了细胞膜和细胞核膜，红细胞裂解液处理时释放的DNA将进入上清并丢失，所以最后得到的DNA 是没有被冰晶刺破的细胞的DNA。