小鼠肿瘤细胞分离液1.070说明书
产品编号：BTN120909
规格：200ml
产品及特点：
本产品是一种无菌、低内毒素水平的密度梯度分离液。其分离原理是根据细胞的密度差异，通过离心使细胞按相应密度梯度分布，从而将相应细胞从细胞悬液中分离出来。本产品密度为1.070 ± 0.001g/mL。
规格及成分：

成分	规格
小鼠肿瘤细胞分离液1.070	200mL
说明书	1份

保存条件：
室温避光储存，保质期2 年。
自备试剂：
室温避光储存，保质期2 年。
使用方法：
注意： 如果要进一步对分离的细胞进行培养，那在制备单细胞悬液和分离细胞的过程均需无菌操作，所用试剂和耗材均需无菌以避免微生物污染。部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其带有的静电作用，可能会导致细胞挂壁，影响分离效果。
一：肿瘤浸润组织单细胞悬液的制备
1. 在无菌条件下摘取肿瘤浸润组织，用眼科剪将肿瘤浸润组织剪成小块。注意：待分离的肿瘤浸润组织必须新鲜，避免冷冻和冷藏。
2. 将尼龙筛网或细胞过滤筛放置于平皿上，加入少量全血及组织稀释液（保证肿瘤浸润组织及获得的细胞处于液体环境中）。
3. 将肿瘤浸润组织放置于筛网上，使用注射器活塞或者是无菌镊子来研磨肿瘤浸润组织（尽量控制研磨力度，保持筛网悬空，避免在皿底上直接研磨而造成大批细胞死亡）。研磨完全后使用全血及组织稀释液冲洗筛网，收集细胞悬液，再经滤网过滤。
4. 将细胞悬液的浓度调到在10⁸～10⁹个细胞/mL。
注意：也可用胶原酶消化法从肿瘤浸润组织得到单细胞悬液。
二：肿瘤细胞的分离。
5. 取一支适当的离心管，加入与肿瘤浸润组织单细胞悬液等量的分离液（分离液不得少于3mL，总体积不能超过离心管的三分之二，否则会影响分离效果）。
注意：开封前要颠倒混匀本产品，请在无菌条件下启封，避免微生物污染。
6. 小心吸取单细胞悬液加于分离液液面上，注意保持两液面界面清晰。（可以使用巴氏德吸管吸取单细胞悬液，然后小心的平铺于分离液上，因为两者的密度差异，将形成明显的分层界面。）
7. 水平转子400～600g室温离心15～30min（根据肿瘤浸润组织单细胞悬液的量确定离心条件，细胞悬液体积越大所需的离心力越大，离心时间越长，最佳的分离条件需摸索）。注意：分离液使用时应始终保持室温（18℃~25℃），如室内温度较低，可将分离液预热。不能在4℃或者是温度较低的条件下离心，否则会导致白膜层中红细胞污染加重。
8. 离心后将出现明显的分层（见下图）：最上层是稀释液层，中间是透明的分离液层，稀释液与分离液之间的白膜层即为细胞层，离心管底部是红细胞与细胞碎片。
 
9. 小心的吸取白膜层（细胞层）的细胞到15mL洁净的离心管中。
10. 加入自备的10mL PBS或细胞洗涤液洗涤到细胞中，250g离心10min，弃上清。
11. 再加入5mL的PBS或细胞清洗液重悬细胞，250g离心10min。
12. 重复步骤10。
13. 细胞重悬备用。