BTN121110 超快核酸转膜试剂盒

超快核酸转膜试剂盒说明书
产品编号：BTN121110
规格：5次(A)/5次(B)
产品及特点：
本产品是基于毛细管转膜法的Southern和Northern印迹膜制备试剂，专门用于从电泳得到的凝胶中制备用于Southern杂交和Northern杂交的印迹膜。本产品具有下列特点：
1.即开即用，提供制备5张13×20cm大小的Southern杂交和Northern杂交印迹膜所需要的印迹膜和溶液，不需要用户单独准备。
2.快速：转膜过程只需要1小时，整个过程只需要2.5小时(对DNA)或1.5小时（对RNA）。
3.跟硝酸纤维素膜、带电尼龙膜、中性尼龙膜和PVDF膜兼容。包括Nytron、Gene Screen Plus、Zetabind、Biotrans、Hybond-N、Immobilon等。
4.A型提供硝酸纤维素膜，适用于400bp以上的靶分子，背景低。B型提供带电尼龙膜，适用于40bp以上的靶分子，结合力强。如需中性尼龙膜或PVDF膜，需另购。
5.使用优化的下向转膜法，不但效率比上行转膜法高30%左右，而且条带弥散度低、分辨率高。
可用琼脂糖胶（包括脉冲电泳胶，DNA电泳、RNA甲醛胶电泳和RNA戊二醛电泳）和DNA PAGE胶。
规格及成分：

成分	规格
溶液A	660g
溶液B	100ml
溶液C	250ml
硝酸纤维素膜13×20cm	5张（仅A型提供）
带电尼龙膜13×20cm	5张（仅B型提供）
说明书	1份

保存条件：
常温运输及保存，有效期一年。
自备试剂：
琼脂糖电泳试剂、去离子水。
使用方法：
一：Southern印迹膜的制备
按常规方法进行电泳（包括脉冲电泳），本试剂盒不提供电泳所需试剂。如果进行常规的Southern杂交，建议使用0.7%琼脂糖进行电泳，分离酶切的基因组DNA。电泳时最好加电泳分子量对照、酶切对照（先将标记的全长lambda DNA或探针质粒与样品DNA的混合，再酶切）、阴性样品（不含检测片段的DNA样品）、杂交分子量对照（标记的1.lambda/Hind III）等。电泳后和荧光标尺并排拍照。
2.变性：首次使用时需配制变性液2.5L（在3L的干净玻璃烧杯中加入约2L自备的去离子水，搅拌缓慢中加入220g成分A和100 mL溶液B，溶解后定容到2.5L后即可用），将凝胶转移到一个至少10倍于胶体积的变性液中，脱色摇床上室温下摇晃处理60分钟（如果使用带正电尼龙膜，此步处理可以缩短到30分钟）。未用完的变性液可放瓶中室温保存。
3.转膜：如果使用带正点的尼龙膜，则直接用上步配制的变性液转膜，如果使用中性尼龙膜和硝酸纤维素膜，则需配置转膜液（在3L的干净玻璃烧杯中加入约2L自备的去离子水，缓慢搅拌中加入440 g成分A和2 mL溶液B，溶解后定容到2.5L后即可用）。将凝胶转移到至少10倍于凝胶体积的转膜液中，脱色摇床上室温下摇晃处理15分钟。
4.测量凝胶的大小，然后借助尺子准确切出一张印迹膜，每边比凝胶大1mm，并切去一角，将印迹膜漂浮于去离子水上20分钟确保全部湿润，再按下图设置下行转膜体系（比上行转膜体系效率高30%）。图中membrane即印迹膜，transfer buffer即转膜液，吸水滤纸厚度为2-3cm，一般按每cm2印迹膜需要1 mL转膜液的比例准备转膜液。对大的凝胶，可以同时使用两张滤纸分别跟两个容器的转膜液连接以便使转膜匀浆。

5.转膜1小时。结束后用铅笔标记核酸结合面以免搞错。注意：不要过夜转膜，否则信号将降低50%。
6.将印迹膜在中和液中处理10分钟，中和液的用量至少为0.5 mL/cm²印迹膜。
7.可将凝胶放入EB（0.5μg/mL）溶液中染色30分钟后UV下观察残留核酸的量，反推转膜效率。此步也可跳过。
8.将印迹膜夹在两层滤纸中间80℃干燥15分钟以固定核酸（不需真空），干燥时间不需延长，否则杂交信号可能会降低。
9.此时印迹膜可直接用于后续的核酸杂交实验或者在干燥状态下保存待用（可放数月）。
二：Northern印迹膜的制备
10.按常规方法进行电泳，本试剂盒不提供电泳所需试剂。本方法适用于甲醛变性胶和乙二醛变性胶，电泳后和荧光标尺并排拍照。
凝胶不需要变性和中和处理（也不能变性，否则RNA将会降解），直接进入转膜步骤（同Southern印迹膜制备的第3到第9步）。