大肠杆菌Stbl3感受态细胞说明书
产品编号：BTN121112
规格：0.1ml×10
产品及特点：
本产品是衍生自大肠杆菌HB101 菌株，经特殊工艺处理得到的感受态细胞。特别适用于克隆不稳定载体片段，如含有同向重复序列的慢病毒DNA 和其他反转录病毒载体。使用pUC19质粒检测，本产品转化效率可达10⁸。本产品具有下列特点：
1. 本产品是常规质粒制备的宿主菌，可进行蓝白斑筛选。
2. 本产品是复制慢病毒载体系统推荐使用的菌株，对慢病毒载体等较大的质粒转化的效果好，能够有效抑制长片段末端重复区的重组，减低错误重组的可能性。
3. 非常稳定，能提高慢病毒载体或其他不稳定载体的克隆效率。
4. 菌株基因型为：F^– mcrB mrr hsdS20(r_B^–, m_B^–) recA13 supE44 ara-14 galK2lacY1 proA2 rpsL20(Str^R) xyl-5 λ^– leu mtl-1
规格及成分：

成分	规格
大肠杆菌Stbl3感受态细胞	0.1ml×10支
说明书	1份

保存条件：
干冰运输、-80℃保存，有效期半年。
自备试剂：
目的DNA、SOC 或LB 培养基等。
使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以50 μL 感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100 μL 感受态细胞能够被1 ng 超螺旋质粒DNA 所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30 分钟。
3. 42℃热击45 秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3 分钟。
4. 每个离心管中加入450 μL 无菌的SOC 或LB 培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床，150 rpm 振荡培养45 分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC 或LB 固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16 小时。
 
注意事项：
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300 μL 转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心（4,000 rpm，2 分钟）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。