柱式鼠尾DNA提取试剂盒说明书
产品编号：BTN130401
规格：50T
产品及特点：
本产品是在柱式动物DNA提取试剂盒（BTN71206）试剂盒基础上优化改良而得，专门针对海洋动物的基因组DNA 提取的试剂盒，可用于鱼类、虾类、贝类、蟹类等海洋动物和水产动物的荃因组DNA 提取，可以有效去除海洋动物组织中的蛋白、脂肪及其他有机化合物等杂质。
本产品主要特点是:
1. 使用本试剂盒提取的基因组DNA 可适用于各种常规分子生物学操作，如:酶切、PCR、文库构建、Southern 杂交等试验。
2. 操作简单安全，1 小时内即可获得超纯的基因组DNA，纯化过程中不需要使用苯酚氯仿等有机试剂。
3. 应用广泛，适用于多种动物细胞和动物组织等。
4. 性价比高，质量和国外同类试剂盒相当，价格更低。
规格及成分：

成分	规格
溶液A	50ml
蛋白酶K溶液（20mg/mL）	1ml
溶液B	15ml
溶液C	13ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	15ml
通用洗脱液	15ml
说明书	1份

保存条件：
常温运输及保存（蛋白酶K溶液需要低温运输，-20℃保存），有效期一年。
自备试剂：
无水乙醇、RNase A溶液。
使用方法：
使用前请先在溶液C 和通用洗柱液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。
1. 切取不多于30mg的组织材料，放入装有200μL溶液A的离心管中，涡旋振荡15 秒。注意：根据提取的组织不同，起始量也稍有不同，腮的细胞量较大，一般建议提取量不超过20 mg。如果需要去除RNA，可加入40μL RNase A（10 mg/mL）溶液（客户自备，BTN3160），振荡15 秒，室温放置5 分钟。
2. 加入 20μL蛋白酶 K 溶液(20 mg/mL)，涡旋混匀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。在56℃下放置，直至组织完全溶解，简短离心以去除管盖内壁的水珠，再进行下一步骤。注意：不同组织裂解时间不同，通常需0.5-2 小时即可完成。扇贝组织0.5 小时基本可裂解完全，虾和鱼类组织1 小时。每小时振荡混合样品2-3 次，每次振荡混匀15 秒。
3. 加入 200 μL 溶液B，充分颠倒混匀，70℃放置10 分钟，溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。注意：加入溶液B 时可能会产生白色沉淀，一般70℃放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取DNA 量少和提取出的DNA 不纯。
4. 加入 200 μL 无水乙醇，充分颠倒混匀，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。
5. 将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个离心吸附柱中（吸附柱放入收集管中），12,000 rpm（～13,400×g）离心30 秒，倒掉废液，将吸附柱放回收集管中。
6. 向离心吸附柱中加入500 μL 溶液C（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm（～13,400×g）离心30 秒，倒掉废液，将吸附柱放入收集管中。
7. 向吸附柱中加入 600 μL 通用洗柱液（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm（～13,400×g）离心30 秒，倒掉废液，将吸附柱放入收集管中。
8. 重复操作步骤7。
9. 将吸附柱放回收集管中，12,000 rpm（～13,400×g）离心2 分钟，倒掉废液。将吸附柱置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR 等）实验。
10. 将吸附柱转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200 μL 通用洗脱液，室温放置2-5 分钟，12,000 rpm（～13,400×g）离心2 分钟，将溶液收集到离心管中。注意：通用洗脱液的体积不应少于50 μL，体积过小影响回收效率。为增加基因组DNA 的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱中，室温放置2 分钟，12,000 rpm（～13,400×g）离心2 分钟。洗脱液的pH 值对于洗脱效率有很大影响。若用超纯水做洗脱液应保证其pH 值在7.0-8.5 范围内，pH 值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA 降解。