Phusion DNA聚合酶说明书
产品编号：BTN130429
规格：100U
产品及特点：
本产品是 Phusion DNA Polymerase 基因经过原核表达，并经多次纯化分离得到。该酶是由高保真Pfu DNA 聚合酶和独特的双链DNA 结合蛋白Sso7d融合而成，其结构示意图如下：
 
本产品具有下列特点：
1. 极强的 DNA 持续合成能力，合成DNA 能力分别是Pfu DNA 聚合酶和Taq DNA 聚合酶的10 倍和2 倍。
2. 快速，相比常用的DNA 聚合酶，合成时间大大缩短，延伸速率为15-30s/kb。
3. 可以短时间内高效、高保真扩增长片段 DNA，最长可以扩增20Kb。
4. 具有 5’-3’和3’-5’核酸外切酶活性，是目前保真度最高的热稳定性聚合酶，保真性是Taq DNA 聚合酶的50 倍，Pfu DNA 聚合酶的6 倍。
5. Phusion DNA 聚合酶扩增的PCR 产物为钝端双链DNA，不能直接用于AT克隆。
规格及成分：

成分	规格
Phusion DNA Polymerase，2 U/μL	50μl
5× Phusion HF Buffer	2×1.5ml
5× Phusion GC Buffer	1.5ml
50 mM MgCl2 Solution	1.5ml
5× PCR Enhancer	500μl
说明书	1份

保存条件：
低温运输，-20℃保存，有效期一年。
自备试剂：DNA 模板、引物、dNTP、超纯水等
使用方法：
1. 设置 PCR 反应（以50 μL 的PCR 反应体系为例）：
在一干净的PCR 管中，依次加入下列成分：

5× Phusion HF Buffer	10 μL
DNA 模板(自备)	＜250 ng
dNTP（2 mM each）(自备)	5 μL
PCR 引物(自备)	10 pmol each
5× PCR Enhancer（选择添加）	1.5 μL
Phusion DNA Polymerase	0.5 μL
补超纯水到	50 μL

注：
（1） 如果反应体系不是50μL，各成分需按等比例增加或减少，也可根据PCR 特点自行调节Phusion DNA Polymerase、模板和引物的用量，进行体系优化。
（2）对于扩增困难或序列较长的模板（如富含GC 的或具有复制二级结构的），可用5×Phusion GC Buffer 代替5×Phusion HF Buffer来进行PCR 反应。
（3）请最后将Phusion DNA Polymerase 加入到反应体系内，防止该酶具有的外切酶活性降解引物。
（4）5×Phusion HF Buffer 中已含有1.5 mM MgCl2。如有需要，可根据PCR 反应特点额外添加MgCl2。
（5）对于GC 含量较高的模板，可选择性加入5×PCR Enhancer。
2. PCR 反应参数：

过程	温度	时间
预变性	98℃	30s-3min
PCR 反应 （25-35 个循环）	98℃	5-10 s
	45-72℃	10-30 s
	72℃	15-30 s/kb
最后延伸	72℃	5-10 min

3. 反应结束后取5-10μL反应产物，琼脂糖凝胶电泳分析。