氨基磁珠说明书
产品编号：BTN130515
规格：2ml
产品及特点：
本产品为表面标记有氨基基团的具有超顺磁性的生物纳米磁珠，直径1μm，浓度为30mg/mL（溶剂为0.05%叠氮钠的水溶液)，pH 稳定范围为1-9。它具有下列特点：
1. 可以与多肽的C 端结合。
2. 可进一步被其它活性基团包被，如疏基、磷酸基，从而分离细胞、蛋白或其它大分子。
3. 快速固定糖类、糖蛋白类、糖脂类，如脂多糖。
规格及成分：

成分	规格
氨基磁珠	2ml
说明书	1份

保存条件：
常温运输，4℃密闭、竖直保存，有效期一年。
自备试剂：
PBS 溶液（50mM，pH 8.0）、戊二醛溶液、BSA、甘氨酸等。
使用方法：
使用前注意事项：
1. 冷冻、干燥和离心等操作会引起磁珠团聚，不易于重悬和分散，并且影响磁珠表面功能基团的化学活性。
2. 在使用本产品前，请务必充分振荡或超声使磁珠保持均匀的悬浮状态。
3. 使用过程中可根据需求，用纯化水或缓冲液洗涤磁珠2～3 次，以去除保存液中乙醇。
4. 本产品需与磁性分离设备配套使用。偶联过程中保持磁珠处于单分散悬浮状态，严禁磁珠出现沉淀或贴壁现象。
5. 为保证最佳的实验结果，请选用合适的配体进行共价偶联反应。偶联时切记不要用有氨基(e.g. Tris) 或是羧基的(e.g. acetate, citrate) 缓冲液。
6. 增加蛋白浓度和延长振荡的时间有利于磁珠的蛋白偶联量。
实例1：氨基磁珠与⽣物配体蛋⽩的戊⼆醛偶联（参考，以BSA为例）
1. 混匀磁珠后，取20mg 氨基磁珠到2 mL 玻璃瓶中（推荐平底瓶），磁液分离去除上清液，加入200μL PBS 溶液（50mM PBS，pH8.0）淋洗磁珠，漩涡震荡1分钟后，磁液分离去除上清液，重复淋洗一次，磁液分离去上清液。
2. 加入新鲜配制的200μL 戊二醛溶液（50mM PBS，pH 8.0 溶液中加入15%的戊二醛）到离心管中，漩涡混匀使磁珠充分悬浮，用锡箔纸包裹后25℃反应1小时（反应避光，以避免戊二醛自身发生聚合），该期间保持磁珠的悬浮状态（可利用恒温摇床摇匀）。
3. 向装有磁珠的离心管中加入50μg～200μg 生物配体BSA（合适用量及浓度需要根据具体实验进行优化，保持溶液pH大约为8.0），轻柔地混匀；
4. 用锡箔纸包裹后25℃偶联4小时，或25℃偶联1小时后放置4℃混匀过夜，偶联间保持磁珠的悬浮状态（可利用恒温摇床摇匀）。
5. 离心管置于磁分离架上磁液分离去除上清液，加入200μL 封闭液溶液（含2%BSA 和2%甘氨酸的50mM PBS，pH 8.0 溶液）重悬磁珠，25℃反应2小时封闭磁珠表面非特异性吸附位点，该期间保持磁珠的悬浮状态（可利用恒温摇床摇匀）；离心管置于磁分离架上磁液分离去除上清液。
6. 加入500μL 保存溶液(0.1%BSA/0.01%吐温-20 和0.05%叠氮钠的PBS 溶液，pH 7.4）淋洗偶联好的磁珠，震荡1分钟后，磁液分离去上清，重复淋洗两次，磁液分离去上清，加入相应的保存液配制自己需要的磁珠浓度，4℃保存。
实例2：氨基磁珠与生物配体蛋白的EDC/EDC+NHS 偶联（参考，以IgG 为例）
1. 配制所需溶液：
1.1、 配制0.05 M MES, 0.5 M NaCl（pH 5）溶液：称取1.066 g 的MES (MW 213.25)和2.93 g 的NaCl (MW 58.5)，溶解在90 mL去离子水中, 调节pH到5.0 后，用去离子水定容到100 mL。
1.2、 配制PBS（pH 7.4）溶液: 称取0.26 g 的NaH2PO4 × H2O(MW 137.99)，1.44 g 的Na2HPO4 × 2H2O (MW 177.99)和8.78 g 的NaCl (MW 58.5)，溶解在1000mL去离子水中，此时的pH为7.4。
1.3、 配制PBS/吐温-20 溶液: 取0.1 mL的吐温-20 溶解在上面的100 mL PBS（pH 7.4）溶液中。
1.4、 配制保存溶液：0.1%BSA，0.01%吐温-20 和0.05%叠氮钠的PBS 溶液，pH 7.4。
2. 混匀磁珠后，取20mg 氨基磁珠到2mL 玻璃瓶（推荐平底瓶）中，磁液分离去除上清液，加入500uL的0.1 M MES, 0.5 M NaCl（pH 5）溶液淋洗磁珠，漩涡震荡1分钟后，磁液分离移除上清液，重复淋洗一次，磁液分离移除上清液。
3. 将50ug-200ug 的抗体溶解在500μL 的0.1 M MES, 0.5 M NaCl（pH 5）溶液里，并加入到磁珠中漩涡震荡1分钟。（根据具体实验适当增加抗体浓度可提高偶联量，我们推荐磁珠mg：抗体蛋白mg=20：1）。
4. 按照磁珠：EDC=20：1 的质量比计算并称取EDC 量1mg，加入到步骤2 中的磁珠和抗体的溶液中，（或者加入EDC/NHS，使用质量比例EDC:NHS=1:1.5），漩涡震荡1分钟。
5. 于恒温摇床25℃震荡孵育2小时。(我们推荐2～8℃反应18小时，保证磁珠始终处于悬浮状态)
6. 向孵育后的磁珠溶液里加入BSA 和Gly，使最终浓度分别达10mg/mL，于恒温摇床25℃震荡孵育4小时，以封闭未反应的活化基团。
7. 磁液分离移除封闭液后，用1mL 的PBS/吐温-20 溶液淋洗磁珠，震荡1分钟后，磁液分离移除上清，重复淋洗三次，磁液分离，移除上清。
8. 加入1mL 保存溶液(0.1%BSA，0.01%吐温-20 和0.05%叠氮钠的PBS溶液，pH 7.4）淋洗偶联好的磁珠，震荡1分钟后，磁液分离去上清，重复淋洗两次，磁液分离去上清，加入保存溶液配制自己需要的磁珠浓度，4℃保存。