链霉亲和素磁珠说明书
产品编号：BTN130521
规格：2ml
产品及特点：
本产品是由磁性纳米颗粒与高纯度的链霉亲和素共价偶联而成。这种微球能用于捕获生物素标记的底物，如抗原、抗体和核酸等。链霉亲和素(streptavidin)与生物素(biotin)的结合是最著名的非共价生物交互作用之一，因此，这也是亲和层析法所使用的一种强大工具。生物分子可以与生物素轻松融合，而层析基质上固定的链霉亲和素配体可以与之结合，而且这种链霉亲和素-生物素相互作用具有较低的非特异亲和性，捕获所需的底物能够直接应用于后续实验。本产品可广泛应用于免疫学检测、核酸纯化、核酸固相杂交检测、细胞分选等分子生物学实验。本产品具有下列特点：
1. 对于生物素化样品的捕获、漂洗及检测等流程操作更加简便。
2. 体系经过优化，更易于大规模、多样品、自动化操作。
3. 磁珠浓度：1%磁珠含量；固相载体：超顺磁性硅基磁珠；磁珠粒径：1 μm；pH 耐受范围：2-9。
4. 载样量（每毫克磁珠）：﹥3000 pmol 游离生物素；﹥450 pmol 生物素标记的单链寡核苷酸；﹥20 μg 生物素化IgG。
5. 缓冲液：10mM PBS，0.1% BSA，0.05% sodium azide，0.1% Tween20。
规格及成分：

成分	A型
链霉亲和素磁珠	2ml
说明书	1份

保存条件：
常温运输，4℃保存，有效期一年。
自备试剂：
样品、SSC 溶液、PBS 溶液等。
使用方法：
通用使用方法：
1. 取适量磁珠（推荐每次取30μL-50μL 磁珠混悬液，用户可根据样品种类及需求调整使用量）于干净离心管中，通过磁力架磁分离后弃上清。注：磁珠使用前请使用上样缓冲液淋洗磁珠3-5 次，以保证磁珠的使用效果。
2. 加入待反应样品，室温振荡反应10-30 分钟后（反应时间根据生物素化分子的大小及空间结构的复杂性可适当延长），置于磁力架上进行磁分离，弃上清，并用上样缓冲液重复淋洗3 次。
3. 链霉亲和素和生物素的结合非常迅速，且结合后不受pH，温度，有机溶剂和其他变性剂的影响。下表列出了常用链霉亲和素和生物素的解离办法及效率（基于游离生物素，与偶联复合物的生物素数据有明显差异），用户也可根据自己样品的需求自行设定洗脱方式。
4. 洗脱后的样品客户可根据需求采用适当方法检测。
洗脱条件参照表

洗脱温度和时间	洗脱溶液	洗脱效率
90℃ for 10min	10mM EDTA pH 8.2 and 95% 甲酰胺	96.8%
90℃ for 5min	10mM EDTA pH 8.2 and 95% 甲酰胺	96.4%
90℃ for 2min	10mM EDTA pH 8.2 and 95% 甲酰胺	96.8%
65℃ for 5min	10mM EDTA pH 8.2 and 95% 甲酰胺	96.4%
65℃ for 2min	10mM EDTA pH 8.2 and 95% 甲酰胺	97.9%
37℃ for 10min	10mM EDTA pH 8.2 and 95% 甲酰胺	41.9%
90℃ for 10min	H2O	7.3%
90℃ for 10min	10mM EDTA pH8.2	52.0%
90℃ for 10min	95% 甲酰胺	35.9%
90℃ for 10min	30mM NaOAc pH 9 and 95% 甲酰胺	95.5%
90℃ for 10min	80mM NaOAc pH 9 and 95% 甲酰胺	97.3%
90℃ for 10min	140mM NaOAc pH 9 and 95% 甲酰胺	95.4%

使用举例：
利用链霉亲和素磁珠从总RNA 中提取mRNA 的方法
1. 取0.1-1mg 的总RNA 样品加入到无菌、无RNase 的1.5ml 离心管中，加入无菌去离子水至终体积为500 μL（注：总RNA 量可低至50 μg，但是在该条件下所提取得到的mRNA 常规电泳检测不到，需要采用RT-PCR 进行微量检测）。
2. 将上步样品管于65℃温浴10min。
3. 加入3 μL 生物素化的Oligo（dT）和13 μL 的20×SSC 溶液到总RNA 样品中，温和混匀，室温放置至完全冷却，这一步需要约10min 左右。
4. 预处理链霉亲和素磁珠
将链霉亲和素磁珠充分混匀后，取适量磁珠于1.5 mL 无菌、无RNase 的离心管内，放在磁力架上，待磁液分离后，移除上清。加1 mL 0.5× SSC 洗涤磁珠，放在磁力架上磁液分离，移除上清，重复两次。加100 μL 0.5× SSC重悬链霉亲和素磁珠。
5. 将第3 步制备的总RNA 混合溶液加入到上步制备的已经洗涤好且重悬的链霉亲和素磁珠溶液中。
6. 室温放置10min，期间每隔1-2min 轻柔混匀以防磁珠出现沉降现象。采用磁力架分离磁珠，小心移除上清，过程中不要触碰到磁珠，该步上清在确定mRNA已经结合并洗脱后再弃掉。
7. 加300 μL 0.1×SSC 溶液温和吹打或是轻弹洗涤磁珠，然后置于磁力架上分离磁珠，磁液分离后小心移除上清，重复三次，最后一步洗涤后尽可能移除所有上清液。
8. 加入100 μL 无RNase 去离子水（洗脱液），温和吹打或轻弹离心管使磁珠和洗脱液充分混匀。65℃水浴2 分钟。
9. 置于磁力架上分离磁珠，将上清转移到一个新的无RNase 的离心管内，不要触碰到磁珠（注：如果在转移过程中将磁珠悬起，可将样品管置回磁力架上重新吸取上清）。
10. 回收洗脱液中的mRNA。
链霉亲和素磁珠提取生物素化IgG
1. 预处理链霉亲和素磁珠
链霉亲和素磁珠的保存需要加入BSA 以保持其活性，故在使用链霉亲和素磁珠之前要彻底除去磁珠储存缓冲液中的BSA、叠氮钠和Tween20。使用前需用PBS 缓冲液于30 分钟之内清洗3 次以使磁珠达到最佳使用效果。
注：在使用前必须彻底重悬链霉亲和素磁珠以保证最佳使用效果和重复性。如果磁珠出现结块现象请勿再继续使用。
2. 将生物素化的IgG 溶解于PBS，IgG 浓度大于2mg/mL 较利于筛选。
3. 取100 μL 预处理过的链霉亲和素磁珠充分震荡混匀，置于磁力架上分离磁珠，去除上清，该过程尽量不要触碰到磁珠团。
4. 取500 μL PBS 重悬磁珠，放于磁力架上，磁液分离后，移除上清，重复洗两次。PBS 重悬磁珠，使磁珠恢复到最初的浓度10 mg/mL。
5. 将第2 步制备的IgG 加到磁珠管内，室温震荡反应30min。保持磁珠处于悬浮状态，以达到好的结合效率。反应结束后，置于磁力架上，磁液分离后，用移液器小心将上清移至一干净离心管内。注：该步上清可以用来检测未结合到链霉亲和素磁珠上的IgG 浓度。
6. 加入1mL PBS 溶液重悬淋洗磁珠，置于磁力架上，磁液分离后，移除上清，重复淋洗两次。
7. 选择合适的洗脱方式洗脱IgG。