大肠杆菌Rosetta-gami (DE3)pLys感受态细胞说明书
产品编号：BTN130560
规格：0.1ml×10
产品及特点：
Rosetta-gami (DE3) pLysS 是Rosetta-gami (DE3)的的衍生菌株，用于具有毒性的含二硫键真核蛋白的表达。它是高度严紧表达宿主菌，包括Tunerlac 透性酶突变以及gor B/gor 突变帮助细胞质内二硫键形成。
其基因型如下：Δ( ara–leu)7697 Δ lac X74 Δ phoA PvuII phoR araD139 ahpC galE galK rpsL F'[lac⁺lacI^q pro] (DE3) gor522::Tn10 (Tc^R)gorB::kan plysS pRARE (Cm^R)
规格及成分：

成分	规格
大肠杆菌Rosetta-gami (DE3)pLys感受态细胞	0.1ml×10支
说明书	1份

保存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。
自备试剂：目的DNA、SOC 或LB 培养基等。
使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为 50-100μL，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以50 μL 感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的 DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100 μL 感受态细胞能够被1 ng 超螺旋质粒DNA所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30 分钟。
3. 42℃热击45 秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3 分钟。
4. 每个离心管中加入 450 μL 无菌的SOC 或LB 培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床，150 rpm 振荡培养45 分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC 或LB 固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16 小时。
注意事项：
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300 μL 转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心（4,000 rpm，2 分钟）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于 37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3. 涂布剩余的菌液可置于 4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。