荧光染色细胞凋亡检测试剂盒说明书
产品编号：BTN130596
规格：200T
产品及特点：
Hoechst 33342是一种活细胞透过性荧光染料，在凋亡细胞中的荧光强度显著增高，其机制与下列因素有关：
1.凋亡细胞膜通透性：凋亡细胞早期细胞膜的完整性没有明显性改变，但细胞膜的通透性已有增强，因此进入凋亡细胞中的Hoechst 33342比正常细胞的多。
2.凋亡细胞的染色体DNA的结构发生了改变从而使该染料能更有效地与DNA结合。
3.凋亡细胞膜上的P-糖蛋白泵功能受到损伤不能有效地将Hoechst 33342排出到细胞外使之在细胞内积累，从而增高了Hoechst 33342在凋亡细胞中的荧光强度。
Hoechst 33342进入凋亡细胞中比正常细胞更容易，而EB、PI或7-AAD等染料不能进入细胞膜完整的活细胞中，即正常细胞和凋亡细胞在不经固定的情况下对这些染料是拒染，坏死细胞由于膜完整性在早期即已破损，可被这些染料染色。
本试剂盒就是基于以上特性，采用Hoechst 33342与另一种活细胞非透过性荧光染料碘化丙啶(Propidium Iodide，PI)直接对活细胞的染色体DNA进行特异性荧光染色的试剂。在荧光显微镜下观察，可见凋亡细胞明亮的蓝色细胞核荧光着色，而正常细胞着色很浅，坏死细胞则会被PI着色产生红色荧光，从而区分出凋亡和坏死细胞。本产品是一种快速、简便、经典的细胞凋亡检测试剂，其具有如下特点：
1.特异性强：利用凋亡细胞的胞膜结构完整性和核形态特征改变区分凋亡和坏死细胞。
2.快速简便：两种染料的染色仅需20-30分钟，一步染色即可完成，适合高通量筛选。
既可使用流式细胞仪进行红色和蓝色双荧光检测，也可使用荧光显微镜检测。
规格及成分：

成分	规格
细胞染色缓冲液	200ml
Hoechst染色液	2×0.5ml
PI染色液	2×0.5ml
说明书	1份

保存条件：
低温运输，-20℃保存，Hoechst染色液和PI染色液需避光保存，有效期一年。
自备试剂：
PBS溶液等。
 
使用方法：
1.每个样品收集约10-100万细胞至1.5 mL离心管内，离心弃上清。细胞沉淀用0.8-1 mL细胞染色缓冲液重悬。
2.加入5 μL Hoechst染色液。
3.加入5 μL PI染色液。
4.混匀，冰浴或4℃孵育20-30分钟。
5.用流式细胞仪检测红色荧光和蓝色荧光。
6.如果使用荧光显微镜检测，检测前离心沉淀细胞，用PBS洗涤一次，再涂片观察红色荧光和蓝色荧光。对于贴壁细胞使用荧光显微镜检测，可以不收集细胞，直接依次按照上述比例加入细胞染色缓冲液、Hoechst染色液和PI染色液，冰浴或4℃染色20-30分钟。染色后PBS洗涤一次，再在荧光显微镜下观察。
结果判断：

荧光染色剂	正常活细胞	凋亡细胞	坏死细胞和极晚期凋亡细胞
Hoechst 33342	不着色（弱蓝色）	蓝色	蓝色
PI	微弱红色	不着色（弱红色）	红色