BTN130597 萤火虫荧光素酶活性检测试剂盒

萤火虫荧光素酶活性检测试剂盒说明书
产品编号：BTN130597
规格：100T
产品及特点：
报告基因检测是真核基因表达调控研究的常用方法。因为检测光量子的方法非常敏感，所以生物发光（bioluminescent）法是报告基因检测最常用的手段。荧光素酶（luciferase）催化底物荧光素（luciferin）的转化，发射出光子。萤火虫荧光素酶(Firefly luciferase)催化的发光反应，具有很好的浓度线性范围（7～8个数量级的线性范围），酶的检测灵敏度达到10^-20 mol。原理如下：
 
本试剂盒采用通用裂解缓冲液（Universal Lysis Buffer，ULB），能与其他类型的报告基因检测和蛋白含量检测兼容。本产品与海肾荧光素酶报告基因检测试剂盒共同使用，可进行一体化的双荧光素酶检测。本产品具有下列特点：
1. 高度灵敏：可检测10-18～10-20 mol 荧光素酶。
2. 线性范围宽：线性范围达到7～8个数量级。
3. 快速简便：特别适合于高通量筛选。
4. 兼容性好：与其它常用报告基因检测试剂兼容。
5. 本产品可足够100次荧光素酶检测。
 
 
规格及成分：

成分	规格
5×Universal Lysis Buffer（通用裂解缓冲液）	20ml
Fassay Buffer	10ml
Fassay Substrate（底物）	0.5ml
说明书	1份

保存条件：
低温运输，-20℃或-80℃避光保存，有效期半年。
自备试剂：
PBS 、双蒸水等。
使用方法：
裂解细胞:
1. 配制裂解液：临用前，取适量5×Universal Lysis Buffer (ULB)，用双蒸水稀释至1×ULB，混匀。1×ULB 可在4℃存放数周。
2. 清洗细胞：倾去培养板/皿中的培养液，加入足量PBS ，轻轻洗涤细胞。完全倾去洗涤液。
3. 裂解细胞：按照下表中推荐的体积，在孔/皿中加入1×ULB ，混匀。培养板可在微型振荡器上震荡5-10 分钟；培养皿可直接用细胞刮刀刮下细胞，将细胞悬液移入1.5mL离心管，在涡旋振荡器上充分混悬震荡30秒。裂解细胞悬液可直接用于发光测定，也可离心30秒，取上清液做发光测定。
表：不同孔/皿所需1×ULB体积

96孔板	48孔板	24孔板	12孔板	6孔板	35mm平皿	60mm平皿
50μL	80μL	150μL	250μL	500μL	500μL	1000μL

配制发光反应液:
测定前，室温溶化Fassay Buffer和Fassay Substrate，混匀。按20/1比例用Fassay Buffer稀释Fassay Substrate，配制所需体积的Fassay Reagent（注意避光）。
测定仪器的设置：
按仪器操作说明开启发光测定仪。手动操作型仪器，将测读时间设为10～20秒。
自动操作型仪器，一般将测定延迟设为2秒，将测读时间设为10～20秒， Fassay Reagent的注入体积设定为100 μL。
手动发光测定：
取待测样品20 μL加入测量管底部，取Fassay Reagent 100 μL立即加入管底部，轻轻敲击管壁3～5次混匀，放入仪器中立即测定，记录发光值为Firefly luciferase的发光单位(RLU)。如用多孔板同时手动测定多个样品，则将各待测样品20 μL分别加入连续的各孔底部，用多道加样器于各孔底加入Fassay Reagent 100 μL，轻轻敲击板侧3～5次混匀，放入仪器中立即测定，记录发光值为Firefly luciferase的发光单位(RLU) 。
自动发光测定：
配制好的Fassay Reagent置于测定仪内并连接好对应管道。取待测样品20 μL分别加入测定管/板孔底部，启动自动测量程序。记录Firefly luciferase的发光单位(RLU)。
注意事项：
1. Fassay Substrate（底物）溶液应密封、盖严存放，避免蒸发。Fassay Buffer和Fassay Substrate（底物）应避免反复冻熔，可分装成合适体积分次使用。
2. 1×细胞裂解液一般在当天测定。如需隔日测定，应将样品于-20℃保存。长期保存应在-80℃。
3. 用多孔板同时手动测定多个样品时，要尽量缩短样品间试剂加入的时间间隔。
4. 本产品与海肾荧光素酶活性检测试剂盒联合使用，可进行一体化的双荧光素酶检测。