β-半乳糖苷酶活性检测试剂盒说明书
产品编号：BTN130599
规格：50管/24样
产品及特点：
β-半乳糖苷酶（β-Galactosidase, β-GAL；EC 3.2.1.23）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，能够催化β半乳糖苷化合物中的β半乳糖苷键水解，此外还具有转半乳糖苷的作用。β-GAL不仅可为植物的快速生长释放储存的能量，还能在正常的多糖代谢、细胞壁组分代谢以及衰老时细胞壁降解过程中催化多糖、糖蛋白以及半乳糖脂末端半乳糖残基的水解，释放自由的半乳糖。
本产品是分光光度法测定β-GAL活力的，测定原理为β-GAL分解对-硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷生成对-硝基苯酚，后者在400 nm有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算β-GAL活性。
规格及成分：

成分	规格
酶提取液	50ml
溶液A	粉剂1瓶
溶液B	15ml
溶液C	50ml
说明书	1份

保存条件：
低温运输，4℃保存，其中试剂A需-20℃保存，有效期半年。
使用方法：
正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定
一、 酶液提取
1. 细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：酶提取液体积（mL）为500～1000：1 的比例（建议500万细菌或细胞加入1 mL酶提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200 W，超声3秒，间隔10秒，重复30次）；15000 g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。
2. 组织：按照组织质量（g）：酶提取液体积（mL）为1：5～10的比例（建议称取约0.1 g组织，加入1 mL酶提取液），进行冰浴匀浆。15000 g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。
二、 测定操作步骤
1. 分光光度计预热30分钟以上，调节波长至400 nm，蒸馏水调零。
2. 取出试剂A，临用前向试剂瓶中加入5 mL蒸馏水，充分溶解备用，制备成溶液A工作液（用不完的溶液A仍需-20℃保存）。
3. 样本测定（在EP管中依次加入下列试剂）：

试剂名称	对照管（μl）	测定管（μl）
样本	50	50
蒸馏水	200	0
溶液A工作液	0	200
溶液B	250	250
迅速混匀，放入37℃准确水浴30分钟
溶液C	1000	1000
充分混匀，400 nm处测定吸光值A，计算ΔA=A测定-A对照。每个测定管需设一个对照管。

三、 酶活性计算公式
标准条件下测定的回归方程为y=0.00543x -0.0027；x为标准品浓度（nmol/mL），y为吸光值。
注：V反总：反应总体积，0.5 mL；V样：反应中样本体积，0.05 mL；V样总：加入酶提取液体积，1 mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万；T：反应时间，30分钟。
1. 按照样本蛋白浓度计算：
酶活性定义：每mg 组织蛋白每分钟产生1 nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
β-GAL活力(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V反总]÷(V样×Cpr)÷T=61.39×(ΔA+0.0027) ÷Cpr
如果需要另外测定，建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。
2. 按照样本鲜重计算：
酶活性定义：每g组织每分钟产生1 nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
β-GAL活力(nmol/min/g鲜重)＝[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V反总]÷(W×V样÷V样总)÷T=61.39×(ΔA+0.0027) ÷W
3. 按细菌或细胞密度计算：
酶活性定义：每1万个细菌或细胞每分钟产生1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
β-GAL活力(nmol/min/104cell)=[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V反总]÷(500×V样÷V样总)÷T=0.123×(ΔA +0.0027)