T7核酸内切酶I说明书
产品编号：BTN130635
规格：250U
产品及特点：
T7 核酸内切酶I 识别并切割不完全配对DNA、十字型结构 DNA、Holliday结构或交叉 DNA、异源双链DNA 或者以更慢的速度切割含切刻的双链 DNA。该酶切割错配碱基 5' 端的第一、第二或第三个磷酸二酯键。其反应原理图如下：
 
该酶主要用途包括：
1. 识别错配 DNA。
2. 分解四方向交叉 DNA 或分支DNA。
3. 检测或切割异源二聚体 DNA 和切刻 DNA。
4. 随机切割线性 DNA 进行shot-gun 克隆。
活性单位定义：
1 单位指在 50 μL 反应体系，37℃条件下，1 小时将90%以上的1 μg 超螺旋十字型结构的 pUC (AT) * 转化成 90% 以上的线性结构所需要的酶量。
* pUC (AT) 来自 pUC19，在其 EcoRI 和 PstI 位点之间的多克隆位点处有修改。
储存Buffer:
20 mM Tris-HCl，200 mM NaCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA，50% Glycerol，0.15% Triton® X-100，pH 7.5 @ 25℃。
反应条件：
1×反应Buffer [50 mM NaCl，10 mM Tris-HCl，10 mM MgCl2，1mM DTT(pH 7.9 @ 25℃)]，37℃温育。
规格及成分：

成分	规格
T7 核酸内切酶I，10000U/mL	25μl
10×反应缓冲液	1.25ml
说明书	1份

保存条件：
低温运输，-20℃保存，有效期一年。
自备试剂：
样品、超纯水等。
使用方法：
使用T7 核酸内切酶I 消化PCR 产物确定基因打靶效率实验步骤举例：

• 在一个塑料离心管中，按次序加入下列成分：

成分	加入量
PCR 产物	200ng
10×反应缓冲液	2μl
超纯水	补水到19μl

• 取上步溶液，在PCR 仪内进行如下操作：

步骤	温度	时间
初步变性	95℃	5min
Annealing	95-85℃	-2℃/second
	85-25℃	-0.1℃/second
Hold	4℃

• 添加 T7 核酸内切酶I 至退火后的PCR 产物（20 μL 体系）：

成分	加入量
PCR产物	19μl
T7 核酸内切酶I	1μl

4. 37℃保温15 分钟。

• 添加 1.5 μL 0.25 M EDTA 终止反应。

备注：
T7 核酸内切酶I 是一种具有底物结构选择性的酶。该酶以不同的活性作用于不同的DNA 底物。切割特定底物时，必须控制酶量和反应时间。反应温度超过42℃时，会增加非特异性核酸酶活性。