BTN130635 T7核酸内切酶I

T7核酸内切酶I说明书
产品编号：BTN130635
规格：250U
产品及特点：
T7 核酸内切酶I 识别并切割不完全配对DNA、十字型结构 DNA、Holliday结构或交叉 DNA、异源双链DNA 或者以更慢的速度切割含切刻的双链 DNA。该酶切割错配碱基 5' 端的第一、第二或第三个磷酸二酯键。其反应原理图如下：
 
该酶主要用途包括：
1. 识别错配 DNA。
2. 分解四方向交叉 DNA 或分支DNA。
3. 检测或切割异源二聚体 DNA 和切刻 DNA。
4. 随机切割线性 DNA 进行shot-gun 克隆。
活性单位定义：
1 单位指在 50 μL 反应体系，37℃条件下，1 小时将90%以上的1 μg 超螺旋十字型结构的 pUC (AT) * 转化成 90% 以上的线性结构所需要的酶量。
* pUC (AT) 来自 pUC19，在其 EcoRI 和 PstI 位点之间的多克隆位点处有修改。
储存Buffer:
20 mM Tris-HCl，200 mM NaCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA，50% Glycerol，0.15% Triton® X-100，pH 7.5 @ 25℃。
反应条件：
1×反应Buffer [50 mM NaCl，10 mM Tris-HCl，10 mM MgCl2，1mM DTT(pH 7.9 @ 25℃)]，37℃温育。
规格及成分：

成分	规格
T7 核酸内切酶I，10000U/mL	25μl
10×反应缓冲液	1.25ml
说明书	1份

保存条件：
低温运输，-20℃保存，有效期一年。
自备试剂：
样品、超纯水等。
使用方法：
使用T7 核酸内切酶I 消化PCR 产物确定基因打靶效率实验步骤举例：

• 在一个塑料离心管中，按次序加入下列成分：

成分	加入量
PCR 产物	200ng
10×反应缓冲液	2μl
超纯水	补水到19μl

• 取上步溶液，在PCR 仪内进行如下操作：

步骤	温度	时间
初步变性	95℃	5min
Annealing	95-85℃	-2℃/second
	85-25℃	-0.1℃/second
Hold	4℃

• 添加 T7 核酸内切酶I 至退火后的PCR 产物（20 μL 体系）：

成分	加入量
PCR产物	19μl
T7 核酸内切酶I	1μl

4. 37℃保温15 分钟。

• 添加 1.5 μL 0.25 M EDTA 终止反应。

备注：
T7 核酸内切酶I 是一种具有底物结构选择性的酶。该酶以不同的活性作用于不同的DNA 底物。切割特定底物时，必须控制酶量和反应时间。反应温度超过42℃时，会增加非特异性核酸酶活性。