大肠杆菌DH10B电击感受态细胞说明书
产品编号：BTN160901
规格：50μl×5
产品及特点：
本电击感受态细胞只能用于电击转化，不能用于热激转化。DH10B 菌株来源于MC1061 菌株，mcrA、mcrBC 及mrr 突变使DH10B 菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA (无论真核生物还是原核生物的基因组DNA 都能被高效的转入DH10B 中)。recA1 和endA1 的突变有利于插入DNA 的稳定和高纯度质粒DNA 的提取。φ80dlacZΔM15 标记的存在使DH10B 可用于蓝白斑筛选，rpsL 赋予其链霉素抗性。DH10B电击感受态细胞适用于大质粒的构建或者各种文库构建。本感受态细胞经特殊工艺制作，经 pUC19质粒检测，转化效率>10¹⁰cfu/μg。
菌株基因型为：[F-mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1endA1 araD139 Δ(ara, leu)7697 galE15 galK λ- rpsL nupG。
规格及成分：

成分	规格
大肠杆菌DH10B电击感受态细胞	50μl×5支
说明书	1份

保存条件：
干冰运输、-80℃保存，有效期半年。
自备试剂：
目的DNA、SOC 培养基等。
使用方法：
1. 将 0.1 cm 的电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5 分钟，待其沥干水分，正置5 分钟，使乙醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5 cm 以方便盖上杯盖，冰中静置5 分钟充分降温。
2. 取-80℃保存的DH10B 电击感受态细胞插入冰中5 分钟，待其融化，加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP 管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。（注：对于质粒，测定转化效率使用1 μL 10 pg/μL 的对照质粒pUC19；对于连接产物，请用乙醇沉淀DNA 后加入适量TE 缓冲液(10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重悬，DNA 浓度不超过100 ng/μL，体积不超过5μL/50μL感受态。）
3. 用 200 μL 枪头(用刀切除0.5 cm 枪尖)将感受态-DNA 混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖。
4. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=2.4 kV (此为BioRad 电转仪推荐参数，也可按所用电转仪推荐的参数操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。
5. 向电击杯中加入 700 μL 不含抗生素的无菌培养基 SOC.，混匀后转移到空EP 管中，37℃，200 rpm 复苏60 分钟。
6. 5000 rpm 离心一分钟收菌，重悬后取100-200μL 涂布到含相应抗生素的2YT 或LB 培养基上。平板上（因菌量较大，若全部涂板请选用直径15cm 培养皿2-5个）。
将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放 37℃培养至少13 小时。
注意事项：
1. 加入DNA时体积不应大于感受态体积的1/10。
2. 电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡，气泡会增加弧光放电风险。
3. 当 DNA 不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。
4. 电击杯里的离子可增加溶液的电导，增大在含有细胞和DNA 的溶液中产生电流和弧光放电的风险。
5. 若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
6. 对于连接产物转化，最好转化前乙醇沉淀DNA 后用适量TE 缓冲液(10 mM Tris HCl,pH7.5; 1 mM EDTA)重悬产物，保证DNA 浓度不超过100 ng/μL。过高浓度连接
产物或过大体积连接产物会降低转化效率，增加弧光放电的风险。
7. 混入质粒时应轻柔操作，吸取感受态细胞时避免用力过猛，以免剪切力过大损伤细胞膜，降低转化效率。
8. 转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
9. 电击感受态细胞最好保存在-80℃以下，高于-80℃超期储存会导致转化效率会下降。