Cre重组酶说明书
产品编号：BTN130665
规格：50U
产品及特点：
Cre重组酶是细菌噬菌体P1的I型拓扑异构酶，催化loxP位点间的DNA进行位点特异性重组。本酶无需能量辅助因子，Cre介导的重组很快在底物与反应产物之间达到平衡。loxP识别元件是一个34bp序列，其两端是两个13bp的反向重复序列，中间是起定向作用的8bp间隔区。重组产物根据 loxP位点的位置和相对方向而不同，两个含单loxP 位点的DNA将被融合。两个正向重复 loxP位点间的DNA将以环状形式切割，而两个反向loxP位点间的DNA序列将被翻转。本产品具有下列用途：
1.两个loxP位点之间DNA的切割。
2.含loxP位点DNA分子的融合。
3.loxP位点之间DNA序列的翻转。
反应条件：
1× Cre重组酶反应缓冲液 [33 mM NaCl，50 mM Tris-HCl (pH 7.5 @ 25℃)，10 mM MgCl2]，37℃温育。
Buffer成分：
15 mM Tris，250 mM NaCl，0.3 mg/ml BSA，50% Glycerol，pH 8.0 @ 25℃。
热失活：
70℃ 10分钟。
活性单位定义：
1单位指在50 μL反应体系，37℃条件下，30分钟使0.25 μg的pLox2+对照DNA产生最大位点特异性重组所需要的酶量。最大重组可以通过琼脂糖凝胶电泳分析或通过反应物转化后行氨苄抗性平板筛选。
规格及成分：

成分	规格
Cre重组酶，1000 U/mL	50μl
10× Reaction Buffer	1ml
说明书	1份

保存条件：
低温运输，-20℃保存，有效期一年。
自备试剂：
DNA样品、超纯水等
使用方法：
使用举例
1.按下列组份配制反应液：

DNA溶液	-
10× Reaction Buffer	5μl
Cre重组酶	1μl（1U）
超纯水	Up to 50 μL

2.37℃孵育30分钟。
3.70℃孵育10分钟，灭活酶活。
注意事项：
1.建议进行琼脂糖凝胶电泳前，将Cre重组酶反应混合物于70℃温育10分钟。
2.由于Cre重组酶反应是一个动态平衡过程，用loxP2+对照底物仅有20-30%发生重组。由于重组产物的量较少，故溴化乙锭染色后呈现微弱条带，同时伴有底物染色强度相应减弱。
3.延长温育时间不会提高重组效率，相反，还可能导致大分子量重组产物的生成。
4.反应中增加Cre重组酶量将形成loxP依赖性Cre-DNA复合物，从而抑制重组反应。