单细胞裂解液(DNA)说明书
产品编号：BTN130803
规格：1ml
产品及特点：
单细胞裂解液（DNA专用）是单细胞DNA提取专用裂解液，产品经过多次优化，含有多种去污剂、变性剂和盐，可有效抑制核酸酶在裂解过程中对核酸的破坏，维持核酸的稳定性。单细胞裂解物可以直接用于全基因组扩增和PCR等试验。本产品足够使用200次以上。
胚胎裂解液用于将卵裂球（blastomere，含2-8个细胞）分离成单个胚胎的溶液，得到的单个细胞如果用于DNA分析（如全基因组扩增或PCR），则可直接用于单细胞裂解（DNA型）裂解，如果用于RNA分析（如RT-PCR），则可直接用于单细胞裂解（RNA型）裂解。本产品不能用于胚囊（blastocyst，含70-100个细胞）。
规格及成分：

成分	规格
溶液A	0.5ml
溶液B	0.5ml
说明书	1份

保存条件：
低温运输，4℃保存，有效期一年。
自备试剂：
PBS
使用方法：
如何制备单个细胞取决于实验样品和实验者所拥有的仪器设备，此处所列步骤仅针对培养细胞、实体组织、淋巴细胞和卵裂球（2-8细胞胚胎）等材料，对其他材料（如干细胞克隆、胚囊、胚胎组织等），用户需自行选用合适的方法制备单细胞。对已经处于单细胞悬浮状态的细胞（如FACS分离细胞、卵细胞等），则可以跳过制备过程而直接进入单细胞裂解步骤：
一、准备单细胞裂解工作液：
1. 裂解一个细胞需要2.5μL裂解液工作液。根据所要裂解的细胞数准备足够的裂解液工作液。工作液的制备方法是将等体积的溶液A和溶液B混合即得。
2. 在每个200μL PCR管中加入2.5 μL新鲜制备的单细胞裂解液工作液，放置在冰上待用。
二、用培养细胞或实体组织制备单细胞：
3. 按常规胰酶方法处理培养细胞或组织，将细胞重悬于自备的液体细胞培养基中。
4. 按常规方法对细胞进行计数。
5. 转移100-4000个细胞到新离心管中，400g 离心4分钟沉淀细胞，小心弃上清（培养基）。
6. 将细胞沉淀重悬于50μL自备的PBS中，使其终浓度为2-80个细胞/μL。
7. 在干净培养皿上点加数个5μL PBS小液滴，加入5 μL细胞悬浮液到第一个小液滴中，然后再从第一个小液滴中转移5μL到第二个小液滴，如此系列稀释样品数次，使得其浓度接近每2.5μL液体中含1个细胞，放冰上待用。
二、用卵裂球（blastomere，2-8细胞胚胎）制备单个细胞：
8. 在培养皿中点数个含5μL胚胎裂解液（BTN130806）的小液滴。
9. 显微镜下用微量注射液加入一个卵裂球到一个胚胎裂解液小液滴中。
10. 转移几次到后面的几个液滴中以便将带入的培养基稀释掉。
11. 在最有一个液滴中，卵裂球的几个细胞将彼此分开成单个细胞。
12. 取单个细胞，转移到数个含5μL PBS的小液滴中洗涤掉胚胎裂解液。
13. 在显微镜下用显微注射仪取只含一个细胞的2.5 μL样品并转移到一个200μL的PCR管中待用。同时设置无样品的阴性对照（2.5 μL样品中不含细胞）。
三：用单细胞裂解液裂解细胞
14. 在显微镜下用显微注射仪取2.5 μL样品，确认含一个细胞后，将其转移到一个含2.5 μL单细胞裂解液的PCR管中。最好同时设置无样品的阴性对照（2.5 μL样品中不含细胞）。在2.5μL样品中，
15. 显微镜下细胞悬液可直接用于单细胞裂解反应。
16. 裂解后可以放冰上待用，如果长期不用，可以放-80℃保存。一般-80℃放置过30分钟到一周时间的样品PCR扩增效果最好。
四：单细胞裂解物的PCR扩增
17. 细胞裂解物从-80℃中取出后，先在65℃中保温10分钟，然后在放冰上放置待用。
18. 以上步得到的细胞裂解物为模板。按常规方法进行PCR。