单细胞裂解液(RNA)说明书
产品编号：BTN130804
规格：1ml
产品及特点：
单细胞裂解液（RNA专用）是单细胞RNA提取专用裂解液，产品经过多次优化，含有多种去污剂、变性剂和盐，可有效抑制核酸酶在裂解过程中对核酸的破坏，维持核酸的稳定性。单细胞裂解物可以直接用于测序和RT-PCR等试验。本产品足够使用200次以上。
规格及成分：

成分	规格
单细胞裂解液（RNA型）	1mL
说明书	1份

保存条件：
低温运输，4℃保存，有效期一年。
自备试剂：
PBS溶液。
使用方法：
如何制备单个细胞取决于实验样品和实验者所拥有的仪器设备，此处所列步骤仅针对培养细胞、实体组织、淋巴细胞和卵裂球（2-8细胞胚胎）等材料，对其他材料（如干细胞克隆、胚囊、胚胎组织等），用户需自行选用合适的方法制备单细胞。对已经处于单细胞悬浮状态的细胞（如FACS分离细胞、卵细胞等），则可以跳过制备过程而直接进入单细胞裂解步骤：
一、用培养细胞或实体组织制备单细胞：
1. 按常规胰酶方法处理培养细胞或组织，将细胞重悬于自备的液体细胞培养基中。
2. 按常规方法对细胞进行计数。
3. 转移100-4000个细胞到新离心管中，400 g离心4分钟沉淀细胞，小心弃上清（培养基）。
4. 将细胞沉淀重悬于50μL自备的PBS溶液中，使其终浓度为2-80个细胞/μL。
5. 在干净的培养皿上点加数个含5μL PBS溶液的小液滴，加入5μL细胞悬浮液到第一个小液滴中，然后再从第一个小液滴中转移5μL到第二个小液滴，如此系列稀释样品数次，使得其浓度接近每2.5μL液体中含1个细胞，放冰上待用。
二、用卵裂球（blastomere，2-8细胞胚胎）制备单个细胞：
6. 在培养皿中点数个含5μL胚胎裂解液（BTN130806）的小液滴。
7. 显微镜下用微量注射液加入一个卵裂球到一个胚胎裂解液小液滴中。
8. 转移几次到后面的几个液滴中以便将带入的培养基稀释掉。
9. 在最后一个液滴中，卵裂球的几个细胞将彼此分开成单个细胞。
10. 取单个细胞，转移到数个含5μL PBS溶液的小液滴中洗涤掉胚胎裂解液。
11. 在显微镜下用显微注射仪取只含一个细胞的2.5μL样品并转移到一个200μL的PCR管中待用。同时设置无样品的阴性对照（2.5μL样品中不含细胞）。
三、用单细胞裂解液裂解细胞
12. 在显微镜下用显微注射仪取2.5μL样品，确认含一个细胞后，将其转移到一个含2.5 μL单细胞裂解液的PCR管中。最好同时设置无样品的阴性对照（2.5μL样品中不含细胞）。
13. 在2.5μL样品中，显微镜下细胞悬液可直接用于单细胞裂解反应。
14. 裂解后可以放冰上待用，如果长期不用，可以放-80℃保存。
四、单细胞裂解物的RT-PCR扩增
15. 细胞裂解物从-80℃中取出后，放冰上融化待用。
16. 以上步操作得到的细胞裂解物为模板，按常规方法进行RT-PCR反应。