胚胎裂解液说明书
产品编号：BTN130806
规格：1ml
产品及特点：
胚胎裂解液用于将卵裂球（blastomere，含2-8个细胞）分离成单个胚胎的溶液，得到的单个细胞如果用于DNA 分析（如全基因组扩增或PCR），则可直接用于单细胞裂解（DNA型）裂解，如果用于RNA 分析（如RT-PCR），则可直接用于单细胞裂解（RNA型）裂解。本产品不能用于胚囊（blastocyst，含70-100个细胞）。
格及成分：

成分	规格
胚胎裂解液	1ml
说明书	1份

保存条件：
低温运输，4℃保存，有效期一年。
自备试剂：
PBS溶液。
使用方法：
如何制备单个细胞取决于实验样品和实验者所拥有的仪器设备，此处所列步骤仅针对培养细胞、实体组织、淋巴细胞和卵裂球（2-8 细胞胚胎）等材料，对其他材料（如干细胞克隆、胚囊、胚胎组织等），用户需自行选用合适的方法制备单细胞。对已经处于单细胞悬浮状态的细胞（如FACS 分离细胞、卵细胞等），则可以跳过制备过程而直接进入单细胞裂解步骤：
一、准备单细胞裂解工作液：
1. 裂解一个细胞需要2.5 μL 裂解液工作液。根据所要裂解的细胞数准备足够的裂解液工作液。工作液的制备方法是将等体积的溶液A 和溶液B 混合即得。
2. 在每个200 μL PCR 管中加入2.5 μL 新鲜制备的单细胞裂解液工作液，放置在冰上待用。
二、用培养细胞或实体组织制备单细胞：
3. 按常规胰酶方法处理培养细胞或组织，将细胞重悬于自备的液体细胞培养基中。
4. 按常规方法对细胞进行计数。
5. 转移 100-4000 个细胞到新离心管中，400 g 离心4 分钟沉淀细胞，小心弃上清（培养基）。
6. 将细胞沉淀重悬于50 μL 自备的PBS 溶液中，使其终浓度为2-80 个细胞/μL。
7. 在干净培养皿上点加数个5 μL PBS 溶液小液滴，加入5 μL 细胞悬浮液到第一个小液滴中，然后再从第一个小液滴中转移5 μL 到第二个小液滴，如此系
列稀释样品数次，使得其浓度接近每2.5 μL 液体中含1 个细胞，放冰上待用。
三、用卵裂球（blastomere，2-8 细胞胚胎）制备单个细胞：
8. 在培养皿中点数个含5 μL 胚胎裂解液（BTN130806）的小液滴。
9. 显微镜下用微量注射液加入一个卵裂球到一个胚胎裂解液小液滴中。
10. 转移几次到后面的几个液滴中以便将带入的培养基稀释掉。
11. 在最有一个液滴中，卵裂球的几个细胞将彼此分开成单个细胞。
12. 取单个细胞，转移到数个含5 μL PBS 溶液的小液滴中洗涤掉胚胎裂解液。
13. 在显微镜下用显微注射仪取只含一个细胞的2.5 μL 样品并转移到一个200μL 的PCR 管中待用。同时设置无样品的阴性对照（2.5 μL 样品中不含细胞）。
四、用单细胞裂解液裂解细胞
14. 在显微镜下用显微注射仪取2.5 μL 样品，确认含一个细胞后，将其转移到一个含2.5 μL 单细胞裂解液的PCR管中。最好同时设置无样品的阴性对照（2.5μL 样品中不含细胞）。
15. 在 2.5μL 样品中， 显微镜下细胞悬液可直接用于单细胞裂解反应。
16. 裂解后可以放冰上待用，如果长期不用，可以放-80℃保存。一般-80℃放置过30 分钟到一周时间的样品PCR 扩增效果最好。
五、单细胞裂解物的PCR 扩增
17. 细胞裂解物从-80℃中取出后，先在65℃中保温10 分钟，然后在放冰上放置待用。
18. 以上步得到的细胞裂解物为模板。按常规方法进行PCR。