凋亡DNA提取试剂盒说明书
产品编号：BTN130812
规格：24T
产品及特点：
细胞凋亡（Apoptosis）是生命个体中的调控基因为了维持个体生命，调控细胞进行新陈代谢，促使不需要的细胞或者具有危险性的细胞自我凋亡（自杀）的现象，与细胞的发生、分化、生理现象（特别在免疫方面）有着密切关系。细胞凋亡时，染色体DNA以核小体为单位（185 bp）进行DNA片断化产生DNA Ladder，这些被片断化了的DNA片段，可以使用电泳的方法进行检出。本试剂盒能够从培养细胞中选择性地提取片断化DNA，能够最大限度地抑制起妨碍作用的完整的染色体DNA的混入，并可以通过电泳法进行高效检出。本产品具有下列特点：
1.操作简便：使用Ready-to-Use型试剂。
2.高灵敏度：能够高灵敏度地检出凋亡细胞的片断化DNA。
3.高特异性：抑制完整的染色体DNA的混入，选择性地提取片段化DNA。
4.快速操作：整体操作约需2.5小时。
5.定量性：与荧光色素组合可以对片断化DNA进行定量。
6.安全性：不使用苯酚氯仿等。
规格及成分：

成分	规格
溶液A	120ml
溶液B	1ml
溶液C	120μl
RNase A溶液（2mg/mL）	60μl
Proteinase K溶液（10 mg/mL）	30μl
微量核酸沉淀剂	3ml
说明书	1份

保存条件：
低温运输，-20℃保存，有效期一年。
自备试剂：
样品、Hanks平衡盐溶液、电泳上样缓冲液等。
使用方法：
1.冰上操作，将细胞样品（10⁶-10⁷）重悬于0.5 mL Hanks平衡盐溶液（自备）或其他常用细胞缓冲液中。
2.将细胞重悬液与5 mL溶液A混合，轻柔颠倒混匀后冰上放置4小时。如果暂时不用，可在-20℃最长保存四周。
3.800g离心5分钟，彻底移弃上清。
4.在细胞沉淀中加入40μL溶液B重悬细胞沉淀，室温放置至少30分钟，期间摇动数次。为方便离心，可将细胞重悬液转移至新的0.5 mL或1.5 mL Eppendorf离心管中，
5.800g离心5分钟，将上清移入到新的Eppendorf管中，并在SpeedVac上真空离心浓缩15分钟。
6.向浓缩物中加入5μL溶液C和2.5 μL RNase A溶液（2mg/mL），混匀后37℃保温30分钟。
7.再加入1 μL Proteinase K溶液（10 mg/mL）溶液，37℃保温30分钟。
8.加5 μL电泳上样缓冲液（自备），常规0.8%琼脂糖电泳分离、EB染色并观察电泳条带。
9.如果所得凋亡DNA溶液需要纯化（溶液中有proteinase K等），需要继续纯化，则加入50 uL酚氯仿混合液（自备），震荡3分钟混匀，13000g离心3分钟后转移上清到新离心管中，再加入2倍体积（约100 uL）微量核酸沉淀剂，混匀后13000g离心15分钟，弃上清，再用1 mL 75%的乙醇洗涤一次，空气放干后加入适当体积的水或TE溶解沉淀，所得溶解即凋亡片段DNA溶液。
使用效果：
 
使用本产品提取细胞DNA效果图。M为DNA Marker，最大条带1.3Kb。
1为正常非凋亡细胞DNA。2为凋亡细胞DNA。