BTN130828 DNA去磷酸化试剂盒

DNA去磷酸化试剂盒说明书
产品编号：BTN130828
规格：20T
产品及特点：
分子克隆时，载体的自连极大降低了连接效率，而对载体DNA 两个5′端的-PO4 基团进行去磷酸化处理可以抑制自连反应。此外在进行DNA 或RNA5′端标记前，也需要将其本来的-PO4 基团去除再加上标记基团。本公司开发的DNA去磷酸化产品就是针对这一目的而开发。它具有下列特点：
1. 基于细菌碱性磷酸酶，反应在较高温度进行，效率更高。
2. 把DNA 和RNA 5′端的-PO4 基团变成-OH 基团，丧失连接能力。
3. 模板可以是单链，也可以是双链，既可以是DNA，也可以是RNA。
4. 处理后的核酸纯化后可以直接用于连接反应和标记反应。
5. 本产品足够20 次去磷酸化实验。
规格及成分：

成分	规格
10×去磷酸缓冲液	100μl
细菌碱性磷酸酶（0.5U/μL）	50μl
超纯水	1ml
说明书	1份

保存条件：
低温运输，-20℃保存，有效期为6 个月。
自备试剂：
核酸片段。
使用方法：
注意：dNTP 和ATP 也是碱性磷酸酶的底物，所以如果核酸溶液中有dNTP 和ATP，一定要先将其去除。否则它们会耗掉大量的碱性磷酸酶，降低DNA 去磷酸化效率。

1. 在微量离心管中配制下列反应液（50μL）：

成分	用量
DNA片段	不超过10pmol
10×去磷酸缓冲液	5μl
细菌碱性磷酸酶	2.5μl
超纯水到	50μl

2、65℃反应30 分钟。如果是RNA 样品，建议在37℃反应30 分钟。
3、酚氯仿抽提去除酶活性，乙醇沉淀DNA 待用（见附）。
附：酚/氯仿抽提DNA、乙醇沉淀浓缩DNA(本试剂盒不提供相关试剂，需要从本公司另购相关试剂，下列操作仅供参考)：
1、在50 μL DNA 溶液中加入50 μL 超纯水增加体积，以免纯化过程中DNA 丢失。如果有必须，可以加入和4μL 核酸助沉剂提高回收效率。
2、加入100μL 酚/氯仿/异戊醇25：24：1 混合液震荡半分钟混匀，室温12000g离心3 分钟，转移上清到新离心管中。
3、重复上步操作一次。
4、加0.1 倍体积（即10μL）的3 M 乙酸钠溶液（pH 5.2）。
5、再加入2.5 倍体积（即250μL）的无水乙醇。
6、混匀后12000g 4℃离心10 分钟，小心弃上清。
7、加入1mL 70%乙醇，短暂离心3 分钟后小心弃上清。
8、短暂离心5 秒，吸弃残留液体（约30-50μL）。
9、室温放置2 分钟干燥后加入适量的超纯水溶解DNA，立即使用或放-20℃长期保存。