免DNA提取PCR试剂盒说明书
产品编号：BTN130985
规格：100T
产品及特点：
本产品是可以直接用新鲜的动物、植物、细菌样品的裂解液进行PCR扩增的试剂盒，它具有下列特点:
1. 操作简单，免去DNA提取、蛋白去除、RNA去除等步骤，5分钟即得用于PCR的模板。
2. 兼容性广，可以用于几乎所有的分子生物学样品，包括细菌、昆虫、真菌、各种植物、各种动物、法医样品（包括全血液、血痕、精斑、唾液、毛发、组织样品、口腔细胞和FTA卡）、石蜡组织切片等。
3. 提供离心管专用研磨杵，便于处理棘手样品。
4. 环保健康，不使用任何有毒有害的试剂。
5. 尤其适用于大规模育种筛选和临床筛选。
6. 本试剂盒可以处理100份不同的样品，足够100次PCR实验。
规格及成分：

成分	规格
溶液A	12ml
溶液B	12ml
PCR MagicMix 3.0	1ml
研磨杵	100只
说明书	1份

保存条件：
溶液A、溶液B和离心管专用研磨杵可以常温和放置，PCR MagicMix 3.0需要低温运输、-20℃保存。有效期一年。
使用方法：
1. 首次使用本产品时需要详细检查溶液A和溶液B是否有结晶析出。如果有需要37℃溶解后摇晃均匀待用。未用完部分可以放常温保存。
2. 根据材料不同参考下表取少量样品到1.5 mL塑料离心管中。

样品种类	取样量
动物组织	1-5mg
鼠尾	2mm长
血液样品	不超过20μl
植物叶片	1-5mg
植物种子（去皮）	1-5mg
酵母培养物	0.2-0.5mL培养物沉淀
细菌培养物	0.2-0.5mL培养物沉淀

注意：未列出样品，用户需要自己摸索最佳用量。对富含多醌多酚的植物材料（如棉花），组织使用量最好不要超过0.5mg。
3. 加入100 μL溶液，确保溶液A完全将样品淹埋。
4. 用研磨杵小心将样品在离心管内捣碎。血液一般情况捣碎30秒即可；实体组织需要捣碎到溶液的颜色变浑浊（植物叶片的话，溶液的颜色将变成绿色）。如需更多研磨杵，可从百奥莱博公司另购。对棘手的样品，还可以增加95℃保温10-60分钟一步，待温度冷却到室温后再进入下一步。残留的实体组织碎片不会影响后续试验。
5. 加入100μL溶液B，震荡10秒混匀。
6. 常温12000rpm离心2分钟。
7. 将上清液转移到一个干净的1.5mL离心管中。如果不用，可以放-80℃长期保存。如果用于后续PCR，请直接进入下步。
8. 直接用裂解液作为模板设置30 μL体系的PCR反应体系如下：

成分	用量
PCR MagicMix 3.0	15μl
细胞裂解液（来于上步）	1-5μl
自备PCR引物1（10uM）	1μl
自备PCR引物2（10uM）	1μl
补水到	30μl

注意：裂解液体积最好不要超过PCR体积的1/10。如果需要增加模板的加入量，则PCR体系应该相应的增加。如果加入5μL裂解液，则可以使用50μL的PCR体系。
9. 放入PCR仪中进行PCR,PCR参数需要根据引物Tm值和靶分子长度等参数设置。一般不低于35次循环。
10. PCR结束后取5-10μL直接上样电泳（本产品不需要上样液），红色染料电泳速度相当于50 bp DNA片段。
注意事项：
1．如果反应体系不是30 μL，各成分需要等按比例增加或减少。
2．如果细胞裂解液中有不明PCR抑制物（植物、土壤和血液等DNA样品常含此类抑制物），可以在PCR体系中加入1/10的PCR抑制物清除剂（BTN60804，30μL体系中加3μL），可能会对PCR有帮助。