BTN131005 cDNA第二链合成试剂盒

cDNA第二链合成试剂盒说明书
产品编号：BTN131005
规格：30T
产品及特点：
cDNA第二链合成的原理是用RNase H使RNA-DNA杂合链中的RNA产生切口，再用DNA Polymerase I通过切口平移(nick translation)反应进行RNA链取代合成cDNA第二链。本产品具有下列特点：
1. 即开即用，含有合成cDNA第二链的所有试剂。
2. 所得双链cDNA可以直接用于后续的常规PCR、real-time PCR、cDNA文库构建、抑制性差减杂交等。
规格及成分：

成分	规格
5×cDNA第二链合成缓冲液	480μl
20×cDNA第二链合成酶混合液	120μl
0.2 M EDTA溶液	120μl
超纯水	2ml
说明书	1份

保存条件：
低温运输，-20℃保存，有效期一年。
自备试剂：
cDNA第一链合成试剂等。
使用方法：
一、合成cDNA第一条链
本试剂盒不提供cDNA第一链合成试剂，用户需自备相关试剂合成cDNA第一链。
二、合成cDNA第二链
1. 在冰浴上向已经完成合成cDNA第一条链的反应体系中依次加入下表试剂：

成分	用量
cDNA第一链合成反应液	10μl
超纯水	48μl
cDNA第二链合成缓冲液	16μl
cDNA第二链合成酶混合液	4μl
轻柔吹打混匀后，短暂离心，16℃保温2小时
自备的T4 DNA聚合酶	2μl
轻柔吹打混匀后，16℃继续保温30分钟
0.2M EDTA溶液	4μl

注：如果不需要将双链cDNA平末端化，则可以跳过T4 DNA聚合酶处理步骤。
2. 电泳5 μL检测cDNA质量。如果cDNA在0.5-10Kb的范围内呈模糊一片，则cDNA合格。如果没看见cDNA或有其他异常，需查找原因后再继续。
3. 所得cDNA可以直接用于后续的常规PCR、real-time PCR、cDNA文库构建、抑制性差减杂交等实验。