BTN131009 NP-40裂解液

NP-40裂解液说明书
产品编号：BTN131009
规格：100ml
产品及特点：
NP-40 裂解液(NP-40 Lysis Buffer)是一种比较温和的细胞组织裂解液。
NP-40 裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP 和co-IP 等。本产品有下列特点：
1. 本产品裂解能力强度温和，对膜蛋白的处理能力一般；对核蛋白的提取能力较好；对胞浆蛋白、胞浆磷酸化蛋白和各种转录因子处理效果很好。
2. 本产品含有各种蛋白酶和磷酸蛋白酶抑制剂，能有效防止各种蛋白酶对目的蛋白的降解。
3. 本产品的主要成分为50mM Tris(pH7.4)，150mM NaCl，1% NP-40 以及sodium pyrophosphate，β-glycerophosphate，sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin 等多种抑制剂，可以有效抑制蛋白降解。

• 用NP-40 裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用BCA 法蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford 法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

规格及成分：

成分	规格
NP-40裂解液	100ml
说明书	1份

保存条件：
低温运输，-20℃保存，有效期一年。
自备试剂：
PMSF
使用方法：
对于培养细胞样品：
1. 融解NP-40 裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF 的最终浓度为 1mM。
2. 对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6 孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。
对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6 孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。
3. 充分裂解后，10000-14000g 离心3-5 分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western 和免疫沉淀等操作。
裂解液用量说明：通常6 孔板每孔细胞加入150 微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200 微升或250 微升。
对于组织样品：
1. 把组织剪切成细小的碎片。
2. 融解NP-40 裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF 的最终浓度为 1mM。
3. 按照每20 毫克组织加入150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)
4. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
5. 充分裂解后，10000-14000g 离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western 和免疫沉淀等操作。
6. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex 使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
备注：
1. 为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。
2. 裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。