BTN131042 miRNA荧光定量RT-PCR检测试剂盒

miRNA荧光定量RT-PCR检测试剂盒说明书
产品编号：BTN131042
规格：25T
产品及特点：
本试剂盒采用SYBR Green I 嵌合荧光染料法的原理来进行miRNA荧光定量PCR检测。本产品是专门为miRNA定量检测而研发的新一代预混形式的荧光定量PCR检测试剂。2×miRNA qPCR Mix包含有Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR增强剂等所有PCR所需要的成分。miRNA qPCR Mix中所含的荧光染料SYBR Green I 可以与所有的双链DNA结合，使该产品可用于不同靶序列的检测而不需合成特异性标记探针。其中的Taq DNA polymerase是经化学修饰的高效热启动酶，配合独特的缓冲体系，使反应特异性更好，灵敏度更高，并能在更广的范围内对miRNA进行准确定量。它具有下列特点：
1. 简便、快捷完成miRNA 的检测。
2. 检测通量高，只需最少的RNA 样本，即可同时进行多种目标miRNA 的检测。
3. 检测特异性好，独特的miRNA 引物设计技术及其优化的反应体系避免了非特异性扩增、特别是Pre-miRNA 的污染。
4. 检测分辨率高：该系统能分辨单碱基差异的miRNA。
5. 检测灵敏度高：可在低至pg 级的总RNA 中检测到特异表达的miRNA。
规格及成分：

成分	规格
2×miRNA qPCR Mix	0.75ml
Reverse Primer(10 μM)	30μl
RNase-Free Water	1ml
miRNA cDNA 第一链合成试剂盒	25T
说明书	1份

保存条件：
低温运输，-20℃保存，有效期一年。
自备试剂：
样品、qPCR 上游引物（Forward primer）等。
使用方法：
一、miRNA cDNA 第一链合成
请参见miRNA cDNA 第一链合成试剂盒产品使用说明书。
二、miRNA 荧光定量检测
1. 室温融化2×miRNA qPCR Mix 和Reverse primer（10 μM）。
2. 使用时请将2×miRNA qPCR Mix 上下颠倒轻轻均匀混合，避免起泡，并经短暂离心后使用。如果试剂没有混匀，其反应性能会有所下降。
3. 按照下表组分配制荧光定量PCR 反应体系：

试剂组份	体积
2×miRNA qPCR Mix	25μl
Forward Primer（自备）	1μl
Reverse Primer	1μl
miRNA 第一链cDNA	xμl
RNase-Free Water	至50μl

• 建议反应程序设置如下：

循环	温度	时间
1×	95℃	10min
40-45×	95℃	15s
	60℃	1min
溶解曲线分析	根据PCR仪要求设定

注意事项：
1. miRNA 第一链cDNA 的加入量不要超过Real time PCR 体积10%。
2. 对于特殊的检测体系，高含量的cDNA 模板易导致非特异性扩增，根据所检测miRNA 的丰度适当的稀释cDNA（稀释10倍或者100倍）。
3. 2×miRNA qPCR Mix 中含有SYBR Green I 和ROX 染料，保存本产品或配制PCR 反应液时应避免强光照射。