BTN131192 超敏化学发光(AP)检测试剂盒

超敏化学发光(AP)检测试剂盒说明书
产品编号：BTN131192
规格：25ml
产品及特点：
本产品用于免疫印迹实验（Western）或核酸印迹实验（Southern 或Northern）中碱性磷酸酶（AP）标记的抗体的超灵敏检测。常用的AP ECL 底物主要以环二氧乙烷类衍生物为主（如AMPPD、Lumigen PPD 等），它们虽然灵敏度高，但达到平台期所需时间很长（30-60 分钟）。为提升速度，本公司开发了本产品。它具有下列特点：
1. 单成分溶液，即开即用，非常方便。
2. 高灵敏度，检测下限达到 10-10mol。
3. 反应时间短，一分钟内达到平台期，平台期长达 10 几小时，大大提升了检测速度。
4. 可以使用照相技术（X-光胶片曝光）或者其他成像方法（如荧光或化学发光成像仪）进行检测。
5. 可用于 Western、Southern、Northern 等印迹杂交检测。
规格及成分：

成分	规格
超敏化学发光(AP)检测试剂	25ml
说明书	1份

保存条件：
常温运输，4℃保存，有效期一年。
自备试剂：
印迹检测相关试剂。
使用方法：
1. 按常规方法进行 Western、Southern、Northern 等印迹杂交实验，直到与AP 标记的二抗孵育结束。注意：
A：为获得最佳实验结果，请务必优化关键的印迹实验参数，包括检测样品的用量、一抗稀释度、AP 标记的二抗的稀释度、杂交膜及封闭试剂的选择。一抗的推荐用量为50 ng/mL-1μg/mL，AP 标记的二抗的推荐用量为5ng/mL-50 ng/mL。
B：由于奶粉中含有动物源性的生物素，故在使用亲和素/生物素系统时，不能使用含奶粉的封闭液。
C：建议在封闭液及所有抗体稀释液中加入高质量的吐温-20（终浓度为0.05%），以减少抗体与印迹膜的非特异性结合。
D：由于叠氮钠是AP 的抑制剂，故所有相关缓冲液中应避免使用叠氮钠。E：不能裸手接触印迹膜以避免蛋白污染。
2. 印迹膜与 AP 标记的二抗孵育完毕后，用自备的洗膜液充分洗涤核酸或蛋白印迹膜。
3. 弃去洗膜液，将本产品滴加在印迹膜的蛋白或核酸吸附面（也是抗体吸附面）上。一张8cm×6cm 的印迹膜一般需要1 mL 的本产品。注意：一定要确保溶液液覆盖整个印迹膜。
4. 室温孵育 5 分钟。
5. 去掉本产品，将印迹膜置于两层干净的保鲜膜之间。注意：一定要避免保鲜膜与印迹膜吸附面之间产生气泡。
6. 如果用 X-光胶片曝光，则在暗室内将X-光胶片和印迹膜的吸附面接触，曝光，洗片按常规操作进行；如果用或使用荧光成像仪或化学发光成像仪，则按照仪器说明书进行检测。
7. 如果背景较高，可将印迹膜再用自备洗膜液洗 2 次，每次3 分钟。
疑难解答：
问题：胶片反相（即信号条带为白色，背景为黑色）、印迹膜上出现棕色或黄色条带、暗室中看到强烈发光、发光信号持续时间过短。
原因：可能是系统中AP 过量，需要稀释AP 标记的二抗至少10 倍以上。
问题：信号较弱或者无信号
原因：可能是发光反应系统中 AP 过多，消耗底物过快，引起信号迅速降低。需要稀释AP标记物至少10 倍以上；也可能是抗原/抗体量不够，需要增加抗原/抗体使用量；还可能使蛋白转移率低，需要优化转移系统。
问题：高背景
原因：可能是系统中AP 过量，需要稀释AP 标记的二抗至少10 倍以上。也可能是封闭不足或封闭试剂选择不当，需要优化封闭步骤；还可能是冲洗不充分或曝光过度或抗原/抗体浓度过高。
问题：蛋白条带为点状
原因：可能是蛋白转移失败或胶片与印迹膜之间有气泡，曝光前需去除印迹膜吸附面和保鲜膜之间的气泡。
问题：出现非特异条带
原因：如果背景高，则可能是系统中AP 过多，需要稀释AP 标记的抗体。
如果背景干净，则可能是一抗用量过多，需要进一步稀释一抗；也可能是SDS 导致抗体的非特异结合，故在实验过程中应避免使用SDS。