Protein A+G琼脂糖说明书
产品编号：BTN131201
规格：2mL
产品及特点：
Protein A、Protein G 均能特异性地与抗体的Fc 区结合，广泛应用于抗体纯化、免疫化学等领域，本产品以琼脂糖凝胶为基质，Protein A、Protein G 按照1:1 比例共价交联到Agarose beads 上，本产品2 mL Protein A+G Sepharose可结合约25 mg human IgG，2mL 中共含有0.5mL Agarose beads。它具有下列特点：
1. 适用于免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)或免疫共沉淀(Co-IP)，也可以用于抗体的纯化。
2. 适用于免疫沉淀所有Protein A Agarose 和Protein G Agarose 单独可以免疫沉淀的抗体，包括Mouse IgG1，IgG2a, IgG2b, IgG3, IgA, Rat IgG1, IgG2a,IgG2b, IgG2c, Rabbit IgG, Rabbit and Goat polyclonal Abs，以及Human IgG1, IgG2,IgG3 和IgG4。
3. 物理化学性质稳定，配基不易脱落，使用寿命长，使用方便。
4. 本产品足够进行50-100次常规的免疫沉淀实验。
规格及成分：

成分	规格
Protein A+G琼脂糖	1ml
说明书	1份

保存条件：
常温运输，4℃保存，有效期一年。请勿冷冻保存本产品！
自备试剂：
蛋白样品、一抗等。
使用方法：
一、免疫沉淀(Immunoprecipitation,IP)：
蛋白样品的准备：
1. 对于 10 厘米细胞培养皿中的贴壁细胞，吸除细胞培养液，PBS 洗涤一次，然后加入500 微升至2 毫升细胞裂解液裂解细胞。可以使用我公司RIPA 裂解液进行细胞的裂解。
2. 对于组织样品参考贴壁细胞使用裂解液的比例进行裂解。
3. 对于悬浮细胞，离心收集细胞后，PBS 洗涤一次，然后参考贴壁细胞的裂解方法进行裂解。
注： 详细的裂解方法参考不同裂解液的详细使用方法。对于不同的培养器材，参考10 厘米培养皿的裂解液的用量进行裂解。如果裂解获得的蛋白样品浓度过高，可以用裂解液或PBS 适当稀释，如果蛋白样品浓度过低，在以后的裂解过程中宜适当减少裂解液的用量。
重悬Protein A+G Agarose
取适量体积Protein A/G Agarose，用PBS 清洗两遍，重悬于等体积的PBS溶液中，得到重悬的Protein A+G Agarose。
去除非特异性结合(可选做)：
1. 取 200 微升至1 毫升蛋白样品，蛋白量约为200 微克至1 毫克，加入约1 微克和免疫沉淀时使用的IgG种属相同的普通IgG和20 微升充分重悬的Protein A+G Agarose，4℃缓慢摇动30 分钟至2 小时。
2. 2500rpm(约1000g)离心5 分钟，取上清用于后续的免疫沉淀。
注：所谓种属相同的IgG 是指，例如后续免疫沉淀时用的是小鼠IgG，则在本步骤中可以加入normal mouse IgG，如无normal IgG 可以加入其它不影响后续检测的其它mouse IgG 类型的抗体。通过和normal IgG 和Protein A+G Agarose 的孵育，可以充分降低非特异性的结合，降低背景。
免疫沉淀：
1. 加入 0.5-2 微克用于免疫沉淀的一抗，4℃缓慢摇动过夜。
2. 再加入20-40 微升充分重悬的Protein A+G Agarose，4℃缓慢摇动1-3 个小时。(为方便后续的洗涤操作可以把加入充分重悬的Protein A+G Agarose 的量调整为50 微升。)
3. 2500rpm(约1000g)离心5 分钟，或瞬时高速离心，小心吸除上清，注意宁可留下少量上清也不能吸掉Protein A+G Agarose。
4. 用准备蛋白样品时的裂解液或PBS 洗涤沉淀5 次，裂解液或PBS 的用量每次为0.5-1 毫升。洗涤时离心条件和吸除上清的要求同上面的步骤。
5. 完成最后一次洗涤后，去除上清，加入20-40 微升1×SDS-PAGE 电泳上样缓冲液Vortex 重悬沉淀，瞬时高速离心把样品离心至管底。
6. 100℃或沸水浴处理3-5 分钟，取部分或全部样品用于SDS-PAGE 电泳，暂时不用的样品可以-20℃保存。
二、免疫共沉淀：
参考免疫沉淀的方法进行，但免疫共沉淀(Co-IP)通常必须使用未经冻存的新鲜蛋白样品。普通的免疫沉淀虽然可以使用冻存的蛋白样品，但也宜用新鲜的蛋白样品为佳。
注意事项：
1. 请勿冷冻保存本产品。
2. 使用前一定要充分重悬，即充分颠倒若干次使混合均匀。
3. 从蛋白样品收集开始，所有步骤中蛋白样品都必须在4℃或冰上操作。
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。