大肠杆菌BL21-CondonPlus(DE3)-RIPL感受态细胞说明书
产品编号：BTN140378
规格：0.1ml×10
产品及特点：
本产品来源于Stratagene 公司的BL21-Gold 菌株，缺少Lon 蛋白酶和OmpT 蛋白酶，从而减少对重组蛋白的降解，补充大肠杆菌缺乏的4 种稀有密码子( AGA、AUA、CCC、CUA) 对应的tRNA （argU、ileY、proL、leuW），提高外源基因，尤其是富含AT-或 GC-的真核基因在原核系统中的表达水平。该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3 区（DE3 区含有T7 噬菌体RNA 聚合酶），可同时表达T7 RNA 聚合酶和大肠杆菌RNA 聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL 等质粒的蛋白表达，同时具有四环素，氯霉素，链霉素，壮观霉素抗性。本产品由特殊工艺制作，经pUC19 质粒检测转化效率高达108cfu/μg。
菌株基因型为：F^- ompT hsdS (r_B^-m_B-) dcm⁺ Tet^r galλ(DE3) endA Hte [argU proLCam^r] [argU ileY leuW Strep/Spec^r]。
规格及成分：

成分	规格
BL21-CondonPlus(DE3)-RIPL感受态细胞	0.1ml×10支
说明书	1份

保存条件：
干冰运输、-80℃保存，有效期半年。
自备试剂：
目的DNA、SOC 或LB 培养基等
使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以100 μl 感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100 μl 感受态细胞能够被1 ng 超螺旋质粒DNA 所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30 分钟。
3. 42℃热击90 秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3 分钟。
4. 每个离心管中加入450 μl 无菌的SOC 或LB 培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床，150 rpm 振荡培养45 分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含有相应抗生素的LB 固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。
注意事项：
1、涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300 μl 转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心（4,000 rpm ，2 分钟）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2、新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3、涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
4. 诱导时，IPTG 浓度可选（0.1-2mM 均可）。
5. 为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG 浓度需实验者优化。