农杆菌AGL1感受态细胞说明书
产品编号：BTN140382
规格：0.1ml×10
产品及特点：
AGL1 菌株为C58, RecA 型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif 和羧苄青霉素抗性基因carb，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的琥珀碱型Ti 质粒 pTiBo542DT-DNA，此质粒含有vir 基因（vir 基因是T-DNA 插入植物基因组必需的元件， pTiBo542DT-DNA 质粒自身的T-DNA 转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA 顺利转移）。
本产品为AGL1 农杆菌化学感受态细胞，适用于水稻、杨树、拟南芥等植物的转基因操作，经pCAMBIA2301 质粒检测转化效率高达10³cfu/μg。
基因型:C58 RecA (rif^r/carb^r) Ti pTiBo542DT-DNA Succinamopine。
规格及成分：

成分	规格
农杆菌AGL1感受态细胞	0.1ml×10支
说明书	1份

保存条件：
干冰运输、-80℃保存，有效期一年。
自备试剂：
质粒DNA、液氮等
使用方法：
转化前准备
1. 冰水浴和37℃水浴。
2. 液氮或干冰/乙醇混合物。
3. 将抗性平板在28℃培养箱中平衡至少15 分钟。
转化方法
1. 取-80℃保存的农杆菌感受态细胞于室温或手心片刻待其部分融化，处于冰水混合状态时插入冰中。
2. 无菌条件下，向刚刚融化的感受态细胞悬液中加入需要转化的质粒，每100μL 感受态细胞加1μg（体积不大于10 μL）质粒DNA，轻柔混匀。冰水浴中静置5 分钟。
3. 将离心管置于液氮中速冻5 分钟（注：也可以用干冰和无水乙醇混合物替代液氮）。
4. 迅速将离心管置于37℃水浴静置中5 分钟，不要晃动水面。然后快速转至冰水浴中静置5 分钟。
5. 加入 800 μL 无抗生素的2×YT 或LB 液体培养基，28-30℃振荡培养2～3小时。使菌体复苏，表达抗性。
6. 5000rpm 离心1 分钟收菌，保留100 μL 左右上清，轻轻吹打重悬菌体，均匀涂布到含有相应抗生素的LB 固体培养基平板上，待平板中的液体完全
吸收后，倒置平板，28-30℃培养48-72 小时。（注：当平板只含有50 μg/mLkan 时，28℃培养48 小时即可；平板中同时加入50 μg/mL kan，20 μg/mL rif 时，需28℃培养60 小时；如果使用的平板含有50 μg/mL rif 则需要28℃培养72-90 小时）。