BTN140428 大肠杆菌BL21感受态细胞

大肠杆菌BL21感受态细胞说明书
产品编号：BTN140428
规格：0.1ml×10
产品及特点：
本产品是采用大肠杆菌BL21 菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA 的化学转化。本产品用作表达载体的宿主，适用于毒性蛋白的表达，适用于不是基于T7 启动子的表达系统。使用pUC19 质粒检测，本产品转化效率可达10⁷。
菌株基因型为：BL21 strain E.coli B F^- dcm ompT hsdS(r_B^- m_B^-) gal。
规格及成分：

成分	规格
大肠杆菌BL21感受态细胞	0.1ml×10
说明书	1份

保存条件：
干冰运输、-80℃保存，有效期半年。
自备试剂：
目的DNA、SOC或LB培养基等。
使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，根据实际情况分装使用。
以下实验以50 μL 感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100μL感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA 所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3. 42℃热击45 秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μL无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床，150 rpm振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。
注意事项：
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300μL转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心（4,000 rpm，2分钟）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。