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公司新闻

BTN140428 大肠杆菌BL21感受态细胞

发布时间:2017-10-03 17:42 |  点击次数:

大肠杆菌BL21感受态细胞说明书
产品编号:BTN140428
规格:0.1ml×10
产品及特点:
本产品是采用大肠杆菌BL21 菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA 的化学转化。本产品用作表达载体的宿主,适用于毒性蛋白的表达,适用于不是基于T7 启动子的表达系统。使用pUC19 质粒检测,本产品转化效率可达107
菌株基因型为:BL21 strain E.coli B F- dcm ompT hsdS(rB- mB-) gal。
格及成分:

成分 规格
大肠杆菌BL21感受态细胞 0.1ml×10
说明书 1份
保存条件:
干冰运输、-80℃保存,有效期半年。
自备试剂:
目的DNA、SOC或LB培养基等。
使用方法:
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL,根据实际情况分装使用。
以下实验以50 μL 感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100μL感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA 所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴30分钟。
3. 42℃热击45 秒,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μL无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床,150 rpm振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于37℃直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16小时。
注意事项:
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可取少量转化产物涂布平板;若转化的DNA 总量较少,可取200-300μL转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少,可通过离心(4,000 rpm,2分钟)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。