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公司新闻

BTN140431 XL10-Gold感受态细胞

发布时间:2017-10-03 17:43 |  点击次数:

XL10-Gold感受态细胞说明书
产品编号:BTN140431
规格:0.1mL×10
产品及特点:
本产品是采用大肠杆菌XL10菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA的化学转化。本产品适用于高效的DNA克隆和质粒扩增,能保证高拷贝质粒的稳定复制,还适合非甲基化DNA的转化。使用pUC19质粒检测,本产品转化效率可达108。本感受态细胞具有四环素和氯霉素抗性。
菌株基因型为:Tetr D(mcrA)183 D(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1 supE44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1 lac Hte [F- proAB lacIqZDM15 Tn10(Tetr) Amy Camr]
规格及成分:

成分 规格
XL10-Gold感受态细胞 0.1mL×10支
说明书 1份
保存条件:
干冰运输、-80℃保存,有效期半年。
自备试剂:
目的DNA、SOC 或LB 培养基等。
使用方法:
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL,可以根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100μL感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴30分钟。
3. 42℃热击45秒,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μL无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床,150rpm振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于37℃直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16小时。
注意事项:
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可取少量转化产物涂布平板;若转化的DNA总量较少,可取200-300μL转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少,可通过离心(4,000 rpm,2分钟)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。