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公司新闻

BTN140479 超敏化学发光(HRP)检测试剂盒2.0

发布时间:2017-10-03 17:43 |  点击次数:

超敏化学发光(HRP)检测试剂盒2.0说明书
产品编号:BTN140479
规格:50ml/250ml
产品及特点:
本产品是超敏化学发光(HRP)检测试剂盒的升级产品,经过优化产品配方,使产品灵敏度有显著增加。本产品具有如下特点:
1.具有超高灵敏度,可达到pg级,发光持续时间长,信号30min内不会发生明显降低。
2.可以使用照相技术(X-光胶片曝光)或者其他成像方法(如荧光或化学发光成像仪)进行检测。
3.抗淬灭能力强。
4.应用广泛,可用于Western、Southern、Northern等各种印迹杂交检测。
5.25mL包装足够500cm2印迹膜显色,250mL包装足够5000cm2印迹膜显色。
格及成分:

成分 50ml 250ml
溶液A 25ml 250ml
溶液B 25ml 250ml
说明书 1份 1份
保存条件:
常温运输,4℃保存,有效期一年。
自备试剂:
印迹杂交相关试剂。
使用方法:
1.按常规方法进行Western、Southern、Northern等印迹杂交实验,直到与HRP标记的二抗孵育结束。注意:A:为获得最佳实验结果,请务必优化关键的印迹实验参数,包括检测样品的用量、一抗稀释度、HRP标记的二抗的稀释度、杂交膜及封闭试剂的选择。一抗的推荐用量为100 ng/mL -500 ng/mL, HRP标记的二抗的推荐用量为10 ng/mL-50 ng/mL。B:由于奶粉中含有动物源性的生物素,故在使用亲和素/生物素系统时,不能使用含奶粉的封闭液。C:建议在封闭液及所有抗体稀释液中加入高质量的吐温-20(终浓度为0.05%),以减少抗体与印迹膜的非特异性结合。D:由于叠氮钠是HRP的抑制剂,故所有相关缓冲液中应避免使用叠氮钠。E:不能裸手接触印迹膜以避免蛋白污染。
2.印迹膜与HRP标记的二抗孵育完毕后,用自备的洗膜液充分洗涤核酸或蛋白印迹膜,在最后一次洗涤的数分钟时间内,完成下步的ECL工作液配制。
3.根据需要量,将溶液A和溶液B按照1:1的比例等体积混合,所得溶液即为ECL工作液。一张8 cm×6 cm的印迹膜一般需要1-5 mL的ECL工作液。注意:配制好的ECL工作液如果用锡箔纸包好(避光),可在室温下放置8小时,保存时需避免阳光或其他强光照射。正常实验室灯光短时间照射不影响ECL工作液的使用。
4.弃去洗膜液,将ECL工作液滴加在印迹膜的蛋白或核酸吸附面(也是抗体吸附面)上。注意:一定要确保ECL工作液覆盖整个印迹膜。
5.室温孵育5分钟。
6.去掉ECL工作液,将印迹膜置于两层干净的保鲜膜之间。注意:一定要避免保鲜膜与印迹膜吸附面之间产生气泡。
7.如果用X-光胶片曝光,则在暗室内将X-光胶片和印迹膜的吸附面接触,曝光,洗片按常规操作进行;如果用或使用荧光成像仪或化学发光成像仪,则按照仪器说明书进行检测。
疑难解答:
问题:胶片反相(即信号条带为白色,背景为黑色)、印迹膜上出现棕色或黄色条带、暗室中看到强烈发光、发光信号持续时间过短。
原因:可能是系统中HRP过量,需要稀释HRP标记的二抗至少10倍以上。
问题:信号较弱或者无信号
原因:可能是发光反应系统中 HRP 过多,消耗底物过快,引起信号迅速降低。需要稀释HRP标记物至少10倍以上;也可能是抗原/抗体量不够,需要增加抗原/抗体使用量;还可能使蛋白转移率低,需要优化转移系统。
问题:高背景
原因:可能是系统中HRP过量,需要稀释HRP标记的二抗至少10倍以上。也可能是封闭不足或封闭试剂选择不当,需要优化封闭步骤;还可能是冲洗不充分或曝光过度或抗原/抗体浓度过高。
问题:蛋白条带为点状
原因:可能是蛋白转移失败或胶片与印迹膜之间有气泡,曝光前需去除印迹膜吸附面和保鲜膜之间的气泡。
问题:出现非特异条带
原因:如果背景高,则可能是系统中HRP过多,需要稀释HRP标记的抗体。
如果背景干净,则可能是一抗用量过多,需要进一步稀释一抗;也可能是SDS导致抗体的非特异结合,故在实验过程中应避免使用SDS。