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公司新闻

BTN140576 大肠杆菌DH10Bac感受态细胞

发布时间:2017-10-03 17:43 |  点击次数:

大肠杆菌DH10Bac感受态细胞说明书
产品编号:BTN140576
规格:0.1ml×10
产品及特点:
本产品是采用特殊工艺处理得到的大肠杆菌DH10 Bac 感受态细胞,适用于昆虫杆状病毒Bac-to-Bac 系统中同源重组的菌株,用于产生重组Bacmid。使用pUC19 质粒检测,本产品转化效率可达107CFU/μg。
DH10Bac 细胞包含亲本Bacmid bMON14272 和辅助质粒 pMON7124。亲本Bacmid 包含一个mini-F 复制子、卡那霉素抗性基因、att Tn7 位点和lac Zα-互补因子。
辅助质粒包含tns ABCD 区域,该区域提供了mini-Tn7 从供体质粒插入亲本Bacmid 靶位点所需要的转座蛋白。供体如pFastBac 系列质粒(pFastBac1,pFastBacDual 等)含有Tn7R 和Tn7L 同源重组臂,Tn7R 和Tn7L 之间包含庆大霉素抗性基因、昆虫病毒多角体基因启动子、多克隆位点和SV40 病毒的PolyA 加尾信号。当含有靶基因pFastBac的重组质粒转化到DH10Bac 细胞后,发生重组后就可产生重组Bacmid,提取纯化重组Bacmid 转染昆虫细胞Sf9 或Sf21 就可以包装产生昆虫病毒。此外,DH10Bac 细胞中的The φ80dlacZDM15 基因的产物可以实现β-半乳糖苷酶的α-互补现象,用于重组bacmid的蓝白斑筛选。
菌株基因型为:F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1endA1 araD139 Δ(ara,leu)7697 galU galK λ-rpsL nupG/pMON14272/pMON7124。
格及成分:

成分 规格
大肠杆菌DH10Bac感受态细胞 0.1ml×10
说明书 1份
保存条件:
干冰运输、-80℃保存,避免反复冻融,有效期半年。
自备试剂:
重组质粒、SOC或LB培养基等。
使用方法:
1. 制 备含有如下抗生素的LB 固体平板:50 μ g/mL Kanamycin,7 μ g/mL gentamicin,10μg/mL tetracycline,100μg/mL X-gal,40 μg/mL IPTG。
2. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 μL,可以根据实际情况分装使用。
以下实验以100 μL 感受态细胞为例。
3. 待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入1-10 ng 重组质粒,用移液器轻轻吹打混匀,冰浴30分钟。
4. 42℃热击90 秒,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3 分钟。
5. 每个离心管中加入900 μL 无菌的SOC(不含抗生素),混匀后置于37℃ 摇床,200rpm 振荡培养4小时。
6. 用 SOC 培养基进行10 倍梯度稀释,如分成3 个稀释梯度10-1,10-2,10-3。
7. 取 100 μL 的各个梯度的培养物用于涂布。等平板中的液体完全吸收后,倒置平板,37℃培养24-48小时。
8. 保留剩余的菌液保存于4℃,视平板上菌落生长情况决定去留。
注意事项:
1. 涂布用量可根据具体实验调整。
2. 新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。