基因转染增强剂说明书
产品编号：BTN140621
规格：0.5ml
产品及特点：
Polybrene (hexadimethrine bromide)（聚凝胺）又名为溴化己二甲铵、海美溴铵，CAS 号：28728-55-4。聚凝胺是一种多聚阳离子聚合物，常用于哺乳动物细胞的DNA 转染实验以增强转染效率。Polybrene 增强转染效率原理图如下：
 
本产品具有如下特点：
1. Polybrene广泛应用于脂质体转染、逆转录病毒介导的基因转染及慢病毒介导的基因转染等实验，可以显著提高各种逆转录病毒、慢病毒及脂质体的转染效率。
2. Polybrene对某些细胞（如末端分化的神经元，DC 细胞）毒性较大，初次应用建议先做毒性测试。
3. Polybrene还是一种有效的抗肝素剂（肝素拮抗剂），常用来生产非特异性凝集的红细胞；还可用于蛋白测序，小剂量的Polybrene在自动测序分析可明显改善多肽的降解现象；PVDF 膜上加入Polybrene能提高膜的亲和性。
规格及成分：

成分	规格
Polybrene，10mg/mL	0.5ml
说明书	1份

保存条件：
低温运输，4℃保存，有效期一年。
自备试剂：
样品等。
 
使用方法：
慢病毒感染举例：
1. 第一天按实验需要将细胞铺板（比如24 孔板）。细胞数以第2 天密度约50%为宜。37℃ 培养过夜。
2. 第二天感染前，从-80℃冰箱取出病毒，冰浴融化，参考相关文献或者根据预实验得到的MOI 值用新鲜完全培养基将病毒稀释成所需浓度。注意：轻轻混匀，不要使用振荡器。
3. 吸去细胞原有培养基，将按照MOI 稀释好的病毒液+培养基+ Polybrene（对于293细胞，终浓度6 μg/mL）加入细胞中，轻轻摇匀。37℃培养过夜。
注：病毒液-培养基-Polybrene 混合液，按如下操作制备混合液：
①添加完全培养基（60mm 培养皿2 mL，100mm 培养皿3 mL），37℃预热；
②加入病毒轻轻混匀；
③加入Polybrene 至终浓度为2μg-12μg/mL。
轻轻混匀。以上每个成分需要按顺序加入。当MOI 高于20 时，建议客户添加Polybrene（终浓度2～12μg/mL，浓度因不同的细胞而异，具体的请参考相关文献）来提高病毒的感染效率。如果感染目的细胞是Jurkat，kasumi，NB4，H929，GBC-SD，MCF-7 等，建议不要添加Polybrene；大部分原代细胞感染也不需要添加Polybrene，以上仅供参考。
4. 感染 48 小时后，吸除含慢病毒的培养基，换为新鲜的培养基。
5. 继续培养24～48 小时后，根据需要收集细胞检测目的蛋白的表达。
质粒转染
1.第一天按实验需要将细胞铺板（比如24 孔板）。细胞数以第2 天密度约50%为宜。37℃ 培养过夜。
2.准备 DNA-培养基-Polybrene 混合液。按如下操作制备混合液：
①添加完全培养基（60mm 培养皿2mL，100mm 培养皿3mL），37℃预热；
②添加10ng～10μg 质粒轻轻混匀；
③加入Polybrene 至终浓度为5μg-10μg/mL。
轻轻混匀。以上每个成分需要按顺序加入。
3.去除培养基，在细胞中加入DNA-培养基-Polybrene 溶液，在37℃孵育细胞6-20h。细胞培养的前6h 内约每1.5h 轻柔混匀。
4.去除 DNA-培养基-Polybrene 溶液。用DMSO shock solution（15%DMSO in 1×HBSS）轻轻盖住细胞（60mm 培养皿3mL，100mm 培养皿4mL）。每次加入溶液时用手轻晃培养盘10s，使得液体均匀分布。然后37℃孵育细胞4min。
5.立即去除DMSO shock solution，用完全生长培养基轻轻清洗细胞2 次。
对于60mm培养皿每次用5 mL 培养液清洗，100mm培养皿每次用10mL培养液清洗。
6.加入完全培养基到细胞中，根据需要进行后续实验。
稳定转化：去除生长培养基，按照1:5 的比例用选择培养基裂解细胞。
瞬时表达：去除生长培养基，加入新鲜的生长培养基。24-72h 后收获细胞。
备注：
Polybrene 的使用浓度依据细胞种类，转染方法等影响，以下使用浓度仅作参考。
1. 为提高腺病毒转染效率和LacZ 转基因表达，使用6μg/mL Polybrene 处理病毒载体后转入BHK-21 细胞（MOI 为100），转染率提高到95%，没有用Polybrene 处理的只有2.3%转染率。
2. 在 KSHV(Kaposi’s sarcoma-associated herpesvirus)纯化和转染实验中，浓缩的病毒与8 μg/mL Polybrene 加到BCBL-1 细胞中37℃下孵育2h。
3. 在 逆转录病毒构建研究中， 用v-rasHa 逆转录病毒转染角质细胞（Keratinocytes）后在含有4 μg/mL Polybrene 培养基中培养3 天，病毒滴度为1×107 virus/mL，MOI 为1。
4. 在 shRNA 编码的慢病毒载体的转染研究中，病毒上清中加入8 μg/mL Polybrene，转染到HEK293 细胞中。
5. 在慢病毒shRNA 转染研究中，将含有6 μg/mL Polybrene 的新鲜培养基加入到培养24h 的RCC10 细胞中，用慢病毒颗粒转染细胞。