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公司新闻

BTN140621 基因转染增强剂

发布时间:2017-10-03 17:43 |  点击次数:

基因转染增强剂说明书
产品编号:BTN140621
规格:0.5ml
产品及特点:
Polybrene (hexadimethrine bromide)(聚凝胺)又名为溴化己二甲铵、海美溴铵,CAS 号:28728-55-4。聚凝胺是一种多聚阳离子聚合物,常用于哺乳动物细胞的DNA 转染实验以增强转染效率。Polybrene 增强转染效率原理图如下:
 
本产品具有如下特点:
1. Polybrene广泛应用于脂质体转染、逆转录病毒介导的基因转染及慢病毒介导的基因转染等实验,可以显著提高各种逆转录病毒、慢病毒及脂质体的转染效率。
2. Polybrene对某些细胞(如末端分化的神经元,DC 细胞)毒性较大,初次应用建议先做毒性测试。
3. Polybrene还是一种有效的抗肝素剂(肝素拮抗剂),常用来生产非特异性凝集的红细胞;还可用于蛋白测序,小剂量的Polybrene在自动测序分析可明显改善多肽的降解现象;PVDF 膜上加入Polybrene能提高膜的亲和性。
格及成分:

成分 规格
Polybrene,10mg/mL 0.5ml
说明书 1份
保存条件:
低温运输,4℃保存,有效期一年。
自备试剂:
样品等。
 
使用方法:
慢病毒感染举例:
1. 第一天按实验需要将细胞铺板(比如24 孔板)。细胞数以第2 天密度约50%为宜。37℃ 培养过夜。
2. 第二天感染前,从-80℃冰箱取出病毒,冰浴融化,参考相关文献或者根据预实验得到的MOI 值用新鲜完全培养基将病毒稀释成所需浓度。注意:轻轻混匀,不要使用振荡器。
3. 吸去细胞原有培养基,将按照MOI 稀释好的病毒液+培养基+ Polybrene(对于293细胞,终浓度6 μg/mL)加入细胞中,轻轻摇匀。37℃培养过夜。
注:病毒液-培养基-Polybrene 混合液,按如下操作制备混合液:
①添加完全培养基(60mm 培养皿2 mL,100mm 培养皿3 mL),37℃预热;
②加入病毒轻轻混匀;
③加入Polybrene 至终浓度为2μg-12μg/mL。
轻轻混匀。以上每个成分需要按顺序加入。当MOI 高于20 时,建议客户添加Polybrene(终浓度2~12μg/mL,浓度因不同的细胞而异,具体的请参考相关文献)来提高病毒的感染效率。如果感染目的细胞是Jurkat,kasumi,NB4,H929,GBC-SD,MCF-7 等,建议不要添加Polybrene;大部分原代细胞感染也不需要添加Polybrene,以上仅供参考。
4. 感染 48 小时后,吸除含慢病毒的培养基,换为新鲜的培养基。
5. 继续培养24~48 小时后,根据需要收集细胞检测目的蛋白的表达。
质粒转染
1.第一天按实验需要将细胞铺板(比如24 孔板)。细胞数以第2 天密度约50%为宜。37℃ 培养过夜。
2.准备 DNA-培养基-Polybrene 混合液。按如下操作制备混合液:
①添加完全培养基(60mm 培养皿2mL,100mm 培养皿3mL),37℃预热;
②添加10ng~10μg 质粒轻轻混匀;
③加入Polybrene 至终浓度为5μg-10μg/mL。
轻轻混匀。以上每个成分需要按顺序加入。
3.去除培养基,在细胞中加入DNA-培养基-Polybrene 溶液,在37℃孵育细胞6-20h。细胞培养的前6h 内约每1.5h 轻柔混匀。
4.去除 DNA-培养基-Polybrene 溶液。用DMSO shock solution(15%DMSO in 1×HBSS)轻轻盖住细胞(60mm 培养皿3mL,100mm 培养皿4mL)。每次加入溶液时用手轻晃培养盘10s,使得液体均匀分布。然后37℃孵育细胞4min。
5.立即去除DMSO shock solution,用完全生长培养基轻轻清洗细胞2 次。
对于60mm培养皿每次用5 mL 培养液清洗,100mm培养皿每次用10mL培养液清洗。
6.加入完全培养基到细胞中,根据需要进行后续实验。
稳定转化:去除生长培养基,按照1:5 的比例用选择培养基裂解细胞。
瞬时表达:去除生长培养基,加入新鲜的生长培养基。24-72h 后收获细胞。
备注:
Polybrene 的使用浓度依据细胞种类,转染方法等影响,以下使用浓度仅作参考。
1. 为提高腺病毒转染效率和LacZ 转基因表达,使用6μg/mL Polybrene 处理病毒载体后转入BHK-21 细胞(MOI 为100),转染率提高到95%,没有用Polybrene 处理的只有2.3%转染率。
2. 在 KSHV(Kaposi’s sarcoma-associated herpesvirus)纯化和转染实验中,浓缩的病毒与8 μg/mL Polybrene 加到BCBL-1 细胞中37℃下孵育2h。
3. 在 逆转录病毒构建研究中, 用v-rasHa 逆转录病毒转染角质细胞(Keratinocytes)后在含有4 μg/mL Polybrene 培养基中培养3 天,病毒滴度为1×107 virus/mL,MOI 为1。
4. 在 shRNA 编码的慢病毒载体的转染研究中,病毒上清中加入8 μg/mL Polybrene,转染到HEK293 细胞中。
5. 在慢病毒shRNA 转染研究中,将含有6 μg/mL Polybrene 的新鲜培养基加入到培养24h 的RCC10 细胞中,用慢病毒颗粒转染细胞。