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公司新闻

BTN140645 大肠杆菌TB1感受态细胞

发布时间:2017-10-03 17:44 |  点击次数:

大肠杆菌TB1感受态细胞说明书
产品编号:BTN140645
规格:0.1ml×10
产品及特点:
本感受态细胞来源于JM 83,是JM 83 hsdR 型,只含有大肠杆菌RNA polymerase,缺少BL21 (DE3)菌株的T7 RNA polymerase,适合NEB 公司的pMAL 系列质粒原核蛋白表达(The pMAL vectors use the E. coli RNA polymerase),不能用于pET 系列质粒的表达,具有链霉素抗性。TB1 感受态细胞由特殊工艺制作,经pUC19 质粒检测转化效率高达108cfu/μg。
菌株基因型为:F– ara Δ(lac-proAB) rpsL (Strr)[φ80 dlacΔ(lacZ)M15] thi hsdR。
格及成分:

成分 规格
大肠杆菌TB1感受态细胞 0.1ml×10
保存条件:
干冰运输、-80℃保存,有效期半年。
自备试剂:
目的DNA、SOC 或LB 培养基等。
使用方法:
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为 50-100μL,根据实际情况分装使用。
以下实验以100 μL 感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100 μL 感受态细胞能够被1 ng 超螺旋质粒DNA 所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴25 分钟。
3. 42℃热击45 秒,迅速将离心管转移到冰浴中并静置2-3分钟,晃动会降低转化效率。
4. 每个离心管中加入700 μL 无菌的2YT 或LB 培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床,200 rpm 振荡培养60分钟使菌体复苏。
5. 5000rpm 离心一分钟收菌,留取100μL左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT 或LB 培养基上。
6. 将平板倒置于37℃培养箱中培养12-16小时。
注意事项:
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多,可取少量转化产物涂布平板;若转化的DNA 总量较少,可取200-300μL转化产物涂布平板。
2. 混入质粒时应轻柔操作。
3. 诱导时,IPTG 浓度可选(0.1-2mM 均可)。
4. 为获得需要量的蛋白,最佳诱导时间,温度,IPTG浓度需实验者优化。