大肠杆菌TB1感受态细胞说明书
产品编号：BTN140645
规格：0.1ml×10
产品及特点：
本感受态细胞来源于JM 83，是JM 83 hsdR 型，只含有大肠杆菌RNA polymerase，缺少BL21 (DE3)菌株的T7 RNA polymerase，适合NEB 公司的pMAL 系列质粒原核蛋白表达(The pMAL vectors use the E. coli RNA polymerase)，不能用于pET 系列质粒的表达，具有链霉素抗性。TB1 感受态细胞由特殊工艺制作，经pUC19 质粒检测转化效率高达108cfu/μg。
菌株基因型为：F– ara Δ(lac-proAB) rpsL (Str^r)[φ80 dlacΔ(lacZ)M15] thi hsdR。
规格及成分：

成分	规格
大肠杆菌TB1感受态细胞	0.1ml×10

保存条件：
干冰运输、-80℃保存，有效期半年。
自备试剂：
目的DNA、SOC 或LB 培养基等。
使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为 50-100μL，根据实际情况分装使用。
以下实验以100 μL 感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100 μL 感受态细胞能够被1 ng 超螺旋质粒DNA 所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴25 分钟。
3. 42℃热击45 秒，迅速将离心管转移到冰浴中并静置2-3分钟，晃动会降低转化效率。
4. 每个离心管中加入700 μL 无菌的2YT 或LB 培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床，200 rpm 振荡培养60分钟使菌体复苏。
5. 5000rpm 离心一分钟收菌，留取100μL左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT 或LB 培养基上。
6. 将平板倒置于37℃培养箱中培养12-16小时。
注意事项：
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300μL转化产物涂布平板。
2. 混入质粒时应轻柔操作。
3. 诱导时，IPTG 浓度可选（0.1-2mM 均可）。
4. 为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。